急性重型顱腦外傷患者血清差異性蛋白應用研究.pdf

1、目的：篩選對比出急性顱腦外傷患者與正常對照之間以及不同傷情之間血清的差異蛋白質(zhì)，評價血清蛋白標記物的意義，并利用血清中的差異性蛋白研究腦損傷急性期的病理生理機制，以達到指導臨床治療的目的。 方法：1.實驗分組：(1)實驗組：50例，均為顱腦外傷患者，男28例，女22例，年齡21-59歲，平均年齡33.23±4.47歲。①病例納入與排除標準：有明確腦外傷病史，發(fā)病后24 h內(nèi)收治入院作為研究對象。近二周未服用影響血腦屏障通透性如激

2、素類的藥物、無感染性疾病、無嚴重心、肝、腎疾病、不伴有免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病及惡性腫瘤，既往無嚴重神經(jīng)系統(tǒng)疾病病史。實驗組根據(jù)腦外傷輕重程度分為輕中型組(GCS評分>8分)和重型組(GCS評分<8分)。②診斷方法：顱腦外傷的診斷：患者均有明確腦外傷病史，有臨床癥狀伴/不伴有神經(jīng)系統(tǒng)陽性體征，影像學檢查主要依據(jù)頭顱CT(Computed tomography)明確顱內(nèi)傷情，按格拉斯哥昏迷分級評分標準進行實驗組分組。③治療方法：所有患者發(fā)

3、病入院后根據(jù)傷情分類分別予以藥物治療和手術(shù)治療。藥物治療包括營養(yǎng)支持、防止并發(fā)癥、預防感染、維持內(nèi)環(huán)境和顱內(nèi)情況穩(wěn)定、營養(yǎng)神經(jīng)治療。(2)對照組：由20名健康體檢者組成，男13例，女7例，年齡35-43歲，平均年齡38.48±2.84歲。2.實驗方法：實驗組于傷后24h內(nèi)抽取清晨空腹前臂靜脈血，對照組病例均于清晨靜息30分鐘后抽取空腹靜脈血。采用金屬親和表面蛋白芯片結(jié)合表面增強激光解析電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)檢測分析實驗患者和正常對照血清蛋

4、白質(zhì)譜。3.統(tǒng)計學處理：利用Ciphergen Proteinchip3.0分析軟件對樣本進行數(shù)據(jù)收集并計算其差異性，以變異系數(shù)(CV)值表示，設(shè)定CV<15％時，不同芯片之間的實驗誤差為可接受范圍。采用Biomarker Wizard3.1軟件分析患者組和對照組血清蛋白指紋圖譜，設(shè)定有意義的蛋白質(zhì)峰出現(xiàn)頻率閾值為10％，分別設(shè)定5，2兩次信噪比(S/N)過濾。確定兩組間蛋白質(zhì)峰值比較時，對初步篩選的蛋白質(zhì)峰進行t檢驗，P<0.05的蛋

5、白質(zhì)峰差異具有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果：1.70例樣本中具有統(tǒng)計學意義的差異性蛋白質(zhì)峰23個(P<0.05)，其中差別具有顯著統(tǒng)計學意義的蛋白質(zhì)峰6個(P<0.01)。2.在23個差異性蛋白質(zhì)峰中質(zhì)荷比(m/z)為7248.79、7229.21、2368.58、2099.08、2079.11的實驗型蛋白質(zhì)峰與正常對照組比較表達降低；質(zhì)荷比(m/z)為6087.40、8.545.08、7307.32、7355.51、4630.20、8.

6、596.66、7748.80、8908.88的實驗組蛋白質(zhì)峰與正常對照組比較表達增高，其中質(zhì)荷比(m/z)為6087.40、8545.08、4630.20三個具有顯著差異性的蛋白質(zhì)峰通過Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫搜索，鑒定其分別為金屬硫蛋白-1F、熱休克蛋白結(jié)合因子-1和膽囊收縮素。3.50例患者樣本(重型組、輕中型組)同法比較可發(fā)現(xiàn)7個具有統(tǒng)計學意義的蛋白質(zhì)峰(P<0.05)，其中質(zhì)荷比(m/z)為4486.62、5411.67、68

7、30.30、6509.23、6330.25的重型組蛋白質(zhì)峰與輕中型組比較表達降低；質(zhì)荷比(m/z)為36523.61、35827.18的重型組蛋白質(zhì)峰與輕中型組比較表達增高，差別具有顯著統(tǒng)計學意義的蛋白質(zhì)峰1個(P<0.01)，并通過Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫搜索，鑒定為類固醇5α還原酶。 結(jié)論：1.急性腦外傷患者和健康體檢者，以及不同程度腦損傷患者血清蛋白質(zhì)表達均有差異性，通過表面增強激光解析電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)可以快速、準確

8、地找到急性顱腦外傷患者血清中的差異性蛋白，為腦外傷研究提供一種新的方法，2.腦外傷患者傷后急性期有23個蛋白質(zhì)表達異常，在3個表達明顯異常的蛋白質(zhì)中，金屬硫蛋白和膽囊收縮素具有神經(jīng)細胞保護作用，而熱休克蛋白結(jié)合因子則能加重繼發(fā)性腦損傷；重型與輕中型腦損害比較有7個蛋白質(zhì)表達異常，其中類固醇5α還原酶表達明顯異常，不利于神經(jīng)保護和恢復。3.腦外傷差異性蛋白的發(fā)現(xiàn)和鑒定，從蛋白水平為腦損傷患者急性期分子機理、病理生理學研究提供了客觀依據(jù)，對