紫元益消丸創(chuàng)新中藥臨床前研究.pdf

1、“紫元益消丸”系中藥復方制劑,由紫河車、蟾酥、蜈蚣、紅花、制半夏、山慈菇、雞內金、玄明粉等八味中藥組成并制備成丸劑,具有扶正固本,解毒消腫,化痰散結,活血化瘀等功效,用于治療食管癌本虛標實證。本處方依據(jù)第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院消化內科專家在前人經驗的基礎上,結合研制者多年的臨床心得提出的。根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的《藥品注冊管理辦法》中藥注冊6類及申報資料要求,采用現(xiàn)代醫(yī)藥研究手段對其制備工藝、質量標準、穩(wěn)定性、主要藥效學及其安全性等

2、進行了系統(tǒng)的臨床前研究,具體研究結果如下。
　　1.紫元益消丸的治則與方解
　　依據(jù)噎膈證(食管癌)的基本病機——本虛標實,痰毒血瘀,阻塞食管,上下不通的發(fā)病特點及其病機,結合中藥藥性理論,提出以扶正固本,解毒消腫,化痰散結,活血化瘀為治療大法,采用紫河車扶正固本為君藥,蟾酥、蜈蚣解毒抗癌共為臣藥,山慈菇、制半夏化痰散結,紅花活血化瘀,玄明粉消腫共為佐藥,雞內金消食護胃為使;共奏扶正固本,解毒消腫,化痰散結,活血化瘀之功能。

3、
　　2.制劑的制備工藝
　　采用正交、中試等試驗與研究方法,確定了紫元益消丸的制備工藝。根據(jù)組方原則及方中藥材的理化特性和各味中藥的藥理作用,進行醇提和打粉設計,即將處方中紫河車、蜈蚣、蟾酥、雞內金4味動物藥材進行打粉入藥,以出粉率作為指標進行考察;取處方中的紅花、山慈菇、制半夏進行醇提,以干浸膏得率作為指標進行提取條件的考察,采用正交實驗法,選擇提取次數(shù)、加乙醇量、提取時間及乙醇濃度四個因素,每個因素選擇三個水平,用干浸

4、膏得率作為考察指標進行綜合評價,結果優(yōu)選出乙醇提取工藝的最佳條件為:紅花、山慈菇、制半夏,凈選除雜,烘干,并將山慈菇、制半夏打粗粉,三者加60％的乙醇8倍量,回流提取2小時,提取1次;將乙醇提取液濾過,回收乙醇,濾液濃縮至相對密度為1.15-1.18的浸膏(60℃),噴霧干燥,得干浸膏粉,粉碎并過100目篩;另取處方量紫河車、蜈蚣、蟾酥、雞內金和玄明粉粉碎,過100目篩,與干浸膏粉混勻,制丸,整丸,干燥,包衣,拋光,即得。
　　按

5、照制劑工藝確定了千丸處方進行適應性中試,在千丸處方的制備工藝穩(wěn)定后,分別以100倍、200倍、400倍千丸處方量進行三批中試,結果表明本制備工藝重現(xiàn)性好,為工業(yè)化生產提供了依據(jù)。
　　3.質量標準研究
　　按照2010年版《中國藥典》(一部)附錄丸劑項下要求,以水分、崩解度、丸重量、微生物限度等指標,建立了本制劑的質量標準。采用中國藥品檢定所提供的紫河車、蟾酥、蜈蚣、雞內金標準藥材作對照,分別建立了制劑中紫河車、蟾酥、蜈蚣、

6、雞內金四味中藥的薄層定性鑒別方法,并且陰性對照樣品于相應的位置上不產生斑點,其方法簡便、結果可靠;依照2010年版《中國藥典》(一部)蟾酥項下含量測定方法,以華蟾酥毒基與脂蟾毒配基含量為指標,建立了HPLC含量測定方法,經多批適應性中試樣品的檢驗,暫定本品每10丸含華蟾酥毒基(C26H34O6)與脂蟾毒配基(C24H32O4)的總量應不低于300μg/10丸。經方法學驗證表明,該含量測定方法制樣簡單、檢測靈敏度高、專屬性強。藉此,制定了

7、紫元益消丸的質量標準草案及其質量標準草案起草說明。
　　4.穩(wěn)定性研究
　　按照紫元益消丸制劑質量標準草案,參照2010年版《中國藥典》(一部附錄IA)丸劑以及《藥品注冊管理辦法》中有關穩(wěn)定性研究的技術要求,分別對三批中試成品(批號分別為20110510,20110515,20110520),進行了恒溫(40±2)℃和相對濕度70-75%條件下放置0-6個月的加速穩(wěn)定性和常溫條件下放置0-18個月的穩(wěn)定性實驗研究,數(shù)據(jù)與0月

8、的進行比較。研究證實,本制劑具有良好穩(wěn)定性,并暫訂紫元益消丸在常溫條件下貯存的有效期為18個月。
　　5.主要藥效學研究
　　采用S180、Eca109荷瘤動物模型、放射增敏等實驗方法,研究證實:(1)時效關系實驗結果表明0.80g/kg紫元益消丸用藥7d,可顯著抑制S180荷瘤小鼠腫瘤的生長(P<0.05);紫元益消丸用藥14d,0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg三劑量組均具有顯著抗腫瘤效果(P<0.05

9、);0.20g/kg紫元益消丸用藥21d,不僅抗腫瘤效果顯著,而且體重及臟器指數(shù)亦好于中劑量與大劑量組。(2)放射增敏實驗結果表明0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg紫元益消丸與放療合用組的抗腫瘤療效均優(yōu)于單純放療組。(3)紫元益消丸對荷Eca109裸小鼠的抗腫瘤作用實驗結果表明,0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg紫元益消丸對荷Eca109細胞株裸鼠腫瘤的生長均具有顯著抑制作用(P<0.05)。(4)抗

10、疲勞實驗以及耐缺氧實驗結果表明,紫元益消丸可以有效提高耐缺氧與抗疲勞能力,小劑量組與中劑量比大劑量組表現(xiàn)良好。(5)紫元益消丸不同劑量對荷瘤小鼠單核細胞吞噬系統(tǒng)(RES)的影響,實驗結果表明紫元益消丸對小鼠的吞噬指數(shù)K及吞噬系數(shù)α均有顯著的增強作用(P<0.05),說明紫元益消丸具有促進小鼠RES吞噬功能的作用,即本品有促進免疫功能,同時還能增強荷瘤動物的免疫功能。(6)紫元益消丸對小鼠抗腫瘤治療有效劑量為0.4g/kg,擬推薦臨床用藥

11、采用口服法;成人日用劑量為3.0g即一次10丸,一日3次;連續(xù)用藥四周為一療程。
　　6.安全性評價
　　6.1.急性毒性實驗:采用灌胃給藥方法,觀察紫元益消丸對昆明小鼠和SD大鼠的急性毒性。實驗顯示受試藥物毒性較低,實驗動物全部存活故無法測出LD50;小鼠的MTD為24.0g/kg,大鼠的MTD為16.0g/kg;各組實驗動物的體重未見顯著異常(P>0.05)。說明,紫元益消丸按擬定臨床劑量用藥具有一定安全性,為新藥研發(fā)以

12、及臨床用藥提供劑量依據(jù)。
　　6.2.大鼠長期毒性實驗:為了觀測紫元益消丸對大鼠可能產生的毒性反應及嚴重程度,了解毒性反應的靶器官及其損害的可逆性質,確定無毒性劑量為擬定臨床人用安全劑量提供參考。本實驗采用SD大鼠160只,雌雄各半;區(qū)分性別并隨機分為對照組、紫元益消丸1.0g/kg、2.0g/kg、4.0g/kg劑量組(分別為推薦臨床用量的20、40、80倍),每周灌胃給藥6d,連續(xù)給藥26周。在用藥13周、26周和停藥4周后分

13、別取血樣進行血液學、血液生化學及病理組織學檢查。結果顯示紫元益消丸小、中、大三個劑量組三個時間點大鼠一般體征(包括大、小便,毛色、行為和飲食等情況)沒有明顯異常變化;體重、HGB、RBC、PLT、WBC總數(shù)及分類等血液指標,血清ALT、AST、BUN、CRE、GLU等血液生化指標,臟器重量和系數(shù)等未見異常變化,且與對照組比較均無顯著性差異(P>0.05)。組織學檢查:肉眼觀察各給藥組動物的臟器與對照組比較未發(fā)現(xiàn)明顯異常。鏡下組織學檢查,