中藥毒理與臨床前評價

1、中藥毒性與臨床前評價,中藥藥理學專論,,臨床不良反應,含馬兜鈴酸中藥,馬兜鈴屬木防己屬木通屬細辛屬千金藤屬青藤屬蝙蝠葛屬 (共計七十多種),毒性表現(xiàn),胃腸道反應肝毒性腎毒性:BUN增高、腎小球濾過率減少 腎變性,嚴重ADR-近年國家SDA通報,清開靈注射液：過敏性休克，注意適應證雙黃連注射劑：過敏及輸液反應、注意單獨、滴速、適應證葛根素注射液：過敏、皮疹，注意療程、劑量、適

2、應證魚腥草注射液*：過敏性休克，已暫停莪術油注射液：過敏、皮疹，注意單獨、滴速、適應證,4、清開靈注射液,《溫病條辨》中安宮牛黃丸的前半部分改良劑型含板藍根、金銀花、梔子、水牛角、珍珠母、黃芩苷、膽酸、豬去氧膽酸清熱解毒、化痰通絡、醒神開竅，治療高熱、炎性疾病及腦血管病主要ADR：過敏性休克 ，1-30分鐘建議配伍后的PH值在6.8-7.5 ，4小時內,4、清開靈注射液－不可配伍制劑,維生復方電解質MG3注射液（高糖維持液）

3、、復方乳酸鈉維生素C、維生素B6青霉素、乳糖酸紅霉素、鹽酸林可霉素丁胺卡那霉素、卡那霉素 、慶大霉素腎上腺素、重酒石酸間羥胺、多巴胺、鹽酸洛貝林,5、雙黃連注射劑,金銀花、黃芩、連翹，上呼吸道感染、支氣管炎等過敏性休克：過敏反應增多，本身含綠原酸、黃芩苷等易過敏成分不超過說明書用量，控制滴速,5、雙黃連注射劑 -不可配伍制劑,青霉素G含鉀的復方葡萄糖輸液-pH、成分下降地塞米松、氫化可的松-影響療效，病程延長 氨基糖苷

4、類和大環(huán)內酯類抗生素：慶大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素（阿米卡星）、鏈霉素、紅霉素－混濁或沉淀諾氟沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、維生素C 、白霉素、氯霉素,6、葛根素注射液,4,7-二羥基-8-ßD葡萄糖異黃酮擴張外周血管，改善微循環(huán)，活血化瘀用于心肌梗塞，冠心病，心絞痛，視網膜動、靜脈阻塞，突發(fā)性耳聾等不可配伍制劑：5%碳酸氫鈉注射液 －pH,6、葛根素注射液－嚴重ADR,過敏性休克溶血性貧血，肝臟、腎臟損傷：藥物免疫

5、原性抗原抗體反應，特異性抗體與藥物形成免疫復合物吸附于紅細胞上，激活補體，紅細胞破壞，溶血。溶血產物（血紅蛋白）腎小管，急性腎功能衰竭，死亡國家SDA修改藥品說明書：增加“偶見急性血管內溶血”,7、魚腥草注射液,癸酰乙醛，揮發(fā)油提取 抗病毒、廣譜抗菌，對流感病毒、腺病毒有滅活作用，對肺炎球菌、流感桿菌有明顯抑制作用，提高肌體免疫力抗炎作用,7、魚腥草注射液,不可配伍制劑：普魯卡因 –醛基與伯氨基藥品質量：全國40家生產，5個產

6、品質量含量-高低差別410倍，不溶性微粒（1/5）質量標準水平參差不齊,8、莪術油注射液,呼吸道感染國家SDA藥品不良反應通報：10歲以下兒童，221例（88-04年）過敏樣反應21％，皮疹15％、呼吸困難6％、過敏性休克4％、死亡1例患者過敏史、過敏體質慎用,8、莪術油注射液－不可配伍制劑,頭孢曲松、頭孢拉定、頭孢哌酮慶大霉素速尿,,毒理學研究,第一章 概述,基本概念 毒理學: 從生物醫(yī)學角度研究外源性化合物對

7、 生物體的損害作用及其機制的學科。 分支學科: 藥物毒理學、食品毒理學、臨床毒理學、 分析毒理學、工業(yè)毒理學、環(huán)境毒理學、 生態(tài)毒理學、管理毒理學。,一、毒理試驗,以觀察、測定、了解藥物對機體引起的損害、機制為目的而設計的試驗。 整體 器官 細胞

8、 分子,1.整體試驗（In vivo）,哺乳動物 急性毒性試驗 (LD50) 多次給藥急性毒性試驗 [LD50(n) ] 長期毒性試驗,2.體外試驗（In vitro）,離體器官：心、肝、腎、肺、腦 條件:利用器官灌流技術將特定的液體通過血管流經離體的臟器 . 目的: 保持生理狀態(tài) 指標:異常作用、代謝情況,In vitro,培養(yǎng)的細胞或細

9、胞器 原代細胞 傳代細胞 細胞株 細胞器：線粒體、微粒體、核等,3. 一般毒性試驗,急性毒性試驗、長毒毒性試驗特點： 毒性指標具有廣泛性和不確定性。 綜合指標：包括生理學、血液學、血液生化學、病理形態(tài)學。,4.特殊毒性,某些特定毒性反應 毒性指標具有明確性。 包括

10、：生殖毒性、遺傳毒性、依賴 性試驗、過敏性試驗、局部 刺激試驗、光敏試驗、免疫 毒性試驗,5.毒理病理學,形態(tài)學試驗 器官、組織、細胞及亞細胞形態(tài)結構變化： 確定損傷的靶器官 靶部位形態(tài)變化的性質、程度 靶部位變化過程

11、和歸轉,二、毒性作用種類,按毒性反應分類 過敏（變態(tài)）反應、特異質反應、 光敏感反應、局部毒性、全身毒性、 可逆和（或）不可逆毒性損傷、即 刻和（或）滯后毒性按作用靶器官分類： 肝毒性、腎毒性、神經系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)------等。,,（一）按毒性反應分類,1.過敏（變態(tài)）反應,概念：藥物或其代謝物（作為抗原或半抗原） 刺激機體產生抗體

12、或（和）致敏淋巴細 胞，當再次用藥時，藥物與相應的抗體 或（和）致敏淋巴細胞發(fā)生特異性結合 導致。特點：與已知藥物的藥理特性無關，效應與劑 量無線性關系。,2.特異質反應,概念：機體對外源化合物的一種遺傳性 異常反應。 如：葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷 血清膽堿脂酶缺乏,3.光敏

13、感反應,類型：光毒性、光變應性概念： 光敏感性藥物反應：注射或內服光敏性藥物 引發(fā)的皮膚炎癥。 光接觸性皮炎：外用藥引發(fā)。特點： 光毒性皮炎：與免疫機制無關。 光變應性皮炎：與其他類型的遲發(fā)性變態(tài)反應相同，第一次發(fā)生有一定的潛伏期。,貫葉連翹提取物光毒試驗結果(豚鼠背部皮膚),A :對照組B :補骨脂素160mg/kg組

14、C路優(yōu)泰1.2g/kg組D貫葉連翹提取物1.2g/kg組E :貫葉連翹提取物0.6g/kg組1： UVA照射后一小時2 : UVA照射后二十四小時3： UVA照射后七十二小時,貫葉連翹提取物光毒試驗結果(豚鼠耳朵),A:對照組UVA照射后六天;B:補骨脂素160mg/kg組UVA照射后六天;C:路優(yōu)泰1.2g/kg組UVA照射后六天;D:貫葉連翹提取物1.2g/kg組UVA照射后六天;E:貫葉連翹提取物0.6g/kg組U

15、VA照射后六天,4.局部毒性,概念：藥物（外源性化合物）在與機體 第一接觸部位產生的毒性（損害）作用。,5.全身毒性,概念：藥物（外源性化合物）進入機體 經吸收和分布到達靶器官或全 身，產生的毒性作用。特點：對機體各器官損傷的程度不同。,6.可逆和（或）不可逆毒性損傷,特點：藥物（外源性化合物）進入機體產生毒性作 用的可逆與否，主

16、要取決于受損病理組織修 復和再生的能力及程度。 可逆性損傷：如肝臟細胞、腸上皮細胞 不可逆損傷：中樞神經系統(tǒng)細胞、致癌、致突變、馬兜 鈴引起的腎損害,7.即刻和滯后毒性,概念： 即刻毒性：一次給藥后在短時間內 （<24h）出現(xiàn)的毒性反應。 滯后毒性：多次給藥后，經一段時間 才出

17、現(xiàn)的毒性反應。,（二）按作用靶器官分類,按作用靶器官分類： 造血系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、 神經系統(tǒng)、內分泌系統(tǒng)、肝臟、腎臟、 免疫、生殖,三、毒性反應特征,（一）選擇毒性（二）耐受性（三）種屬和個體差異,（一）選擇毒性,概念：在接觸（暴露）情況（條件）完全相同的情況下， 化學物質（工業(yè)毒物、藥品、農藥）對生物體表現(xiàn)出 來的毒性（反應）的差異。產生原因：

18、 1. 藥物對機體引起的毒性：組織結構和細胞外毒性、器官的特有毒性、基本細胞毒性。 2.機體細胞兩方面的特性：基本細胞功能、器官特有功能。 3.藥物在體內的生物轉化和排泄的差別，導致藥物在體內的分布、蓄積不同。,（二）耐受性,概念：對先前給予過的化合物毒性反應（作用）呈降低的狀態(tài)。產生原因： 處置耐受性 組織對化合物的反應毒性作用降低,（三）種屬和個體差

19、異,種屬差異：藥物的毒性反應在不同種屬或同一種屬不同品系動物間的反應差異。個體差異：藥物對同一種屬中不同個體表現(xiàn)出的不同反應。,四、劑量效應關系,（一）劑量（二）效應 發(fā)生在分子、細胞、器官或組織水平上 局部的和（或）系統(tǒng)的 可逆的或不可逆的 即刻發(fā)生的或滯后發(fā)生的 量效應或質效應的改變,五、毒性參數(shù),半數(shù)致死劑量或濃度（LD50或L

20、C50）最小致死劑量或濃度（MLD LD1或MLC LC1）最大耐受劑量或濃度（MTD LD0或MTC LC0）觀察到的有害作用的最低劑量（LOAEL）未觀察到有害作用的劑量（NOAEL）治療指數(shù)（TI）安全界限：LD1/ED99,,毒理學研究中的一些新進展,,一、口服LD50實驗的替代方法（一）經典LD50求測法方法學上的不足 1.消耗的動物量大 2.獲得的信息有限（二）OEC

21、D建議采納的急毒檢測方法 1.人性化的終點檢測指標(毒性癥狀) 2.WHO推薦的外源化合物急性毒性五 級分級標準（三）非致死性急性毒性試驗,,二、“3Rs”試驗（一）替代模型(replacement models)： 相對替代：動物只提供組織器官、細胞 絕對替代：細胞株、計算器模擬 選用人類相應的組織或培養(yǎng)的細胞

22、 從細胞分子水平闡述毒性作用機制 利于動物福利主義的實施。 優(yōu)點：避免種屬差異（二）減少實驗動物應用的實驗方(reduction modele)（三）改良和精細的實驗過程(refinement procedures),,三、神經毒性評價 方法學(肝腦共同培養(yǎng)的腦細胞) 例:環(huán)磷酰胺 代謝產物(腦毒性)四、中樞神經系統(tǒng)功能的細胞模型（一）中樞神經系

23、統(tǒng)毒性的一般細胞功能： 膜電位下降、鈣超載、自由基損傷（二）一般檢測指標：膜電壓、自由基生成、基因分析等。（三）中樞神經系統(tǒng)毒性的特殊細胞功能：離子通道、GABA、 N-受體。,,五、眼刺激性的體外試驗評價,眼刺激反應評分標準眼刺激反應分值角膜混濁（以最致密部位為準） 無混濁0 散在或彌漫性混濁，虹膜清晰可見1 半透明區(qū)易分辨，虹膜模糊不清2 出現(xiàn)灰白色半透明區(qū)，

24、虹膜細節(jié)不清，瞳孔大小勉強看輕3 角膜不透明，由于混濁，虹膜無法辨認（角膜刺激最高4分）4虹膜 正常0 皺褶明顯加深，充血、腫脹、角膜周圍有輕度充血，瞳孔對光仍有反應1 出血、肉眼可見壞死、對光無反應（或出現(xiàn)其中一種反應）2（虹膜刺激最高2分）結膜 A．充血（系指眼結膜球結膜部位） 血管正常0 血管充血呈鮮紅色1 血管充血呈深紅色，血管不易分辨2 彌漫性充血呈紫紅色3

25、B．水腫 無水腫0 輕微水腫1 明顯水腫，伴有部分眼瞼外翻2 水腫至眼瞼半閉合3 水腫至眼瞼超過半閉合4 C．分泌物 無分泌物0 少量分泌物1 分泌物使眼瞼和結膜潮濕或粘著2 分泌物使整個眼區(qū)潮濕或粘著3（結膜刺激最高10分）眼刺激最高綜合評分16分,,眼刺激評價標準 0～3.9無刺激性 4～8.9輕度刺激性 9～12.9中度刺激性

26、 13～16重度刺激性,芎龍止痛滴鼻液對眼的影響,,,A1～４：滴 5% 吐溫80 0.2ml 后 1小時、6小時、24小時、7天的眼睛 B1～４：滴芎龍止痛滴鼻液 0.2ml 后 1小時、6小時、24小時、7天的眼睛,,新方法：動物眼部組織器官 培養(yǎng)的狗腎單細胞層組成的實 驗模型 應用雞胚絨毛膜尿囊膜,,六、皮膚刺激性的體外試驗評價 皮膚刺激性

27、反應敏感的生物指標 熱休克蛋白,,藥物毒性與藥物安全性評價,一、藥物安全評價中的動物實驗,（一）動物實驗是必需的（二）實驗動物的選擇 1. 種屬間差異 2. 性別（三）動物實驗中劑量—反應關系（四）動物實驗結果的解釋,二、毒性試驗的終點和觀察指標,（一）藥物對機體的損害（毒性作用）（二）藥物對機體的非損害作用（三）實驗動物一般狀況（四）臟器指數(shù)（五）毒

28、理病理學檢查（六）生理生化指標（七）免疫毒性的觀察,三、體外毒性試驗與藥物安全性評價,注意因素： 細胞生物學特性的差異 體外、體內藥代動力和藥效動力的差異,四、體內、體外試驗數(shù)據(jù)歸納、比較和評價,（一）注意不可逆的毒性作用（二）闡明作用機制的重要性（三）安全系數(shù)（四）試驗方法的可靠性、相關性 1. 只有當特定目的檢測方法的應用特征、優(yōu)點和缺點被適當確定后才認為它是可靠的

29、2. 替代方法（或體外離體試驗）的應用（五）綜合評價,,第二章 中藥毒性研究,,肝臟毒性及安全性評價,,,一、肝臟組織學及生理學基礎,（一）肝臟的組織學特點 富有血管(入肝、出肝） 肝細胞在代謝上起重要作用 藥物毒性的主要靶器官,,（二）肝臟的生理功能 參于代謝（生化反應500種以上）、糖原儲存、分泌膽汁、具解毒、吞噬、防御機能。,,藥物的化學結構發(fā)生變化分

30、兩個步驟：第一步，在酶的催化下進行氧化、還原或水解等。藥物經過轉化后，藥理活性可能出現(xiàn)、增加、減弱或被滅活。失活占大部分。水合氯醛還原成三氯乙醇，毒性增強。第二步，藥物或其代謝產物與體內的某些物質，如葡萄糖醛酸、甘氨酸、硫酸等結合，或發(fā)生甲基化或乙?；＝Y合以上基團后，藥物極性增加，水溶性增加，活性減弱或消失，同時也有利于排出體外。某些生物堿（士的寧、嗎啡)可蓄積肝臟，緩慢釋放，減少中毒脫氨作用：在肝內合成尿素排除,二、肝毒性反

31、應及其機制,（一）肝毒性類型及機制 1. 肝壞死: 肝細胞死亡、局灶性或彌漫性。 氯仿、甲醇、四環(huán)素、氨甲碟呤、川楝子、黃藥子、蓖麻子 機制（1）自由基學說(ccl4)---脂質過氧化 活性氧形成:P450在催化過程中,第二個電子被引入,產生過氧化氫,GSH大量消耗,細胞對活性氧的防御能力降低 （2）共價結合學說

32、 （3）.破壞細胞內鈣離子穩(wěn)態(tài)(鈣超載),,類脂沉積癥或脂肪肝(脂質>5%) 癥狀：輕度不易觀察。肝重增加、體積增大、變硬、表面和切片 滑膩、光鏡可見細胞內大量脂滴、蘇丹染色陽性。 原因：酒精中毒、營養(yǎng)過?；虿蛔?、中毒 機制：脂蛋白的蛋白質部分合成受阻（高劑量四環(huán)素、乙硫酸） 極低密度脂蛋白的磷脂部分合成受阻 細胞內丟鉀，脂肪的

33、運輸受阻,,膽汁淤積 有肝外淤積、肝內淤積 氯丙嗪、紅霉素、雌激素、五色梅 機制： 干擾或阻斷膽紅素正常代謝過程 膽汁分泌減少 膽汁流動障礙 例：a –萘基異氫基酸脂（工具藥） 大鼠小鼠均可看到與劑量相關的

34、淤膽改變。24-48小時有相應改變。,,血管損傷（小靜脈閉塞綜合癥） 微小靜脈內膜受損、炎癥------靜脈壁水腫壞死，血管壁纖維化、管腔堵塞。 藥物：砷、喹啉類生物堿、菊三七,,肝硬化 細胞變性壞死、纖維組織增生、顆粒狀硬結 三種病理改變交錯進行，肝小葉結構和血循環(huán)途徑改建，肝變形變硬。 四氯化碳（工具藥）,,誘發(fā)腫瘤 黃曲

35、霉素、黃樟醚、千里光堿、蘇鐵苷、生物堿與亞硝胺結合物 機制：使體細胞核DNA螺旋紊亂 活潑雙鍵、環(huán)氧結構—具烷化作用,（二）藥物性肝損害的機制和易感性,藥物性肝損害的機制 直接作用（與劑量有關） 宿主對藥物的特異敏感性（與劑量無關）肝毒性發(fā)展的兩個主要因素： 1. 混合功能氧化酶活性（將乙酰物水解，水解物以共價鍵與肝臟大分

36、子結合） 2.肝內谷胱甘肽含量 肝臟對藥物損傷的易感性1.肝臟對藥物損傷的易感性：藥物代謝、聚集2.機體對肝損傷的易感性,四、中藥肝臟毒性的評價,（一）能引起肝毒性的中藥 1. 引起肝毒性的中藥 姜半夏、桑寄生、蒲黃、光慈姑、天花粉或其注射制劑可引起肝功能異常； 千里光可造成肝內血管閉塞； 野百合提取物野百合堿等會引起急性肝炎。,,川楝子、蒼耳子、草烏、黃藥子、蓖麻子、雷公藤煎劑可

37、致中毒性肝炎； 復方青黛丸、壯骨關節(jié)丸、華佗再造丸、大活絡丹、小柴胡湯等導致肝損害。 大黃、澤瀉或靜脈注射或滴注四季青注射液，會引起膽紅素代謝障礙導致黃疸。 引起肝毒性的中草藥還有：昆明山海棠、千里光、艾葉等 。,2. 生物堿引起的肝毒性（1）吡咯雙烷類生物堿 千里光屬、豆科野百合屬 表現(xiàn)為肝細胞壞死、輕度脂肪聚集和肝靜脈小分支的阻塞性損傷。 損傷機制可能是由于吡咯衍生物與DNA和其他細胞成分

38、反應損傷肝實質細胞和肝血管。,,原因：所有吡咯雙烷生物堿含有吡咯雙烷類的核心結構，由兩個帶4位氮原子的五環(huán)分子融合組成，其肝毒性衍生物是1-羥甲基-1,2-脫氫-7-羥基吡咯雙烷酯。毒性在于其1、2位不飽和性和與分支鏈酸的酯化作用。（2）其他生物堿：八角楓、北豆根、喜樹,3. 黃樟醚的肝毒性 黃樟醚是肝微粒體酶的強抑制劑，在體內它能羥基化成致癌作用強于母體的1’-羥基黃樟醚。4. 黃藥子的肝毒性 它對肝臟的損害屬于對肝細

39、胞的直接毒性作用，是藥物及其代謝產物在肝臟達到一定濃度時，干擾細胞代謝的結果。,,5. 蛋白毒素引起的肝毒性（1）蒼耳子 含有毒蛋白、毒苷等，是一種細胞質毒。（2）蓖麻子 含蓖麻毒蛋白及蓖麻毒堿 ，蓖麻毒蛋白是一種免疫毒素,是與植物毒素或細胞毒素共價結合的細胞結合性抗原或抗體。能抑制真核細胞的蛋白質合成。LD50為6-12mg/kg,,6. 鞣質的肝毒性 鞣質及其他聚酚類的植物成分在體內催化亞硝酸鹽和二級胺發(fā)

40、生反應，形成有致癌作用的N-亞硝胺。7. 其他類的肝毒性:大黃、苦楝皮,,（二）肝毒性的安全評價方法 整體動物實驗 體外試驗方法,,1. 整體動物實驗常用的方法（1）大體解剖檢查與稱重重量計算臟器指數(shù)（2）血液生化學檢查 ALT、AST、ALP、LDH（3）肝臟生物化學成分和代謝過程檢查 三酰甘油、肝蛋白、肝糖原

41、 脂質、GSH、丙二醛（4）膽汁排泄功能試驗：BSP（磺溴鈦）排泄（5）形態(tài)學檢查,2. 體外試驗方法,（1）肝勻漿:測定線粒體中Ca-Mg-ATP酶、微粒體中P450 3型前膠原等細胞外基質（2）肝臟灌流：4小時為宜，測灌流液中酶、離子（3）游離肝細胞法：用膠原酶將肝細胞分離，成懸浮肝細胞。檢查細胞大分子變化，如：抑制蛋白質和RNA的合成、增加DNA的合成、肝細胞的活性和生

42、長。,,（4）原代培養(yǎng)肝細胞方法：可進行多種指標的觀察（5）肝細胞細胞器方法：探討作用靶點 微粒體、線粒體 細胞核、核膜、溶酶體（6）肝臟切片,,（三）方法學評價 定性、定量評價：顯微鏡 體積、表面積、密度 生化指標,,腎臟毒性及安全性評價,,,一、組織學及生理學基礎,（一）腎臟的組織學特點（二）腎臟的生理功能 1. 生成尿液

43、，排出代謝廢物、毒物和藥物 2. 調節(jié)體內的水分和滲透壓 3. 調節(jié)電解質的濃度 4. 腎臟的內分泌功能 分泌腎素、紅細胞生成素（EPO）、1，25-二羥膽骨化醇、緩激肽與前列腺素,二、腎毒性反應及機制 （一）藥物導致腎損害的原因和毒性作用機制,1. 腎毒性與腎臟組織學和生理特點有關 * 腎臟血流量接受循環(huán)血流最多，通過藥物

44、量較多 * 具有豐富的毛細血管，易發(fā)生抗原抗體復合物沉積 * 近端小管的分泌和重吸收作用 * 腎髓質的逆流倍增機制使乳頭部藥物濃度增高 * 腎小管pH改變，導致藥物在腎內沉積 * 腎臟濃縮尿液，腎小管內藥物濃度增加 * 藥物排泄時，腎臟多種酶活性被抑制或滅活,2. 藥物引起腎毒性的作用機制 * 藥物對細胞的直接作用（汞、氨基糖苷類）

45、 * 與谷胱甘肽的結合作用 * 共價結合（四氯化碳）. * 免疫性因素 * 金屬硫蛋白的保護作用減弱（鎘）,（二）腎毒性類型及特點,1. 腎臟的病理反應 急性腎衰竭、慢性腎衰竭、位點選擇性損害（腎小球損害、近曲腎小管損害、腎病綜合征、慢性間質性腎炎）2. 腎臟對藥物毒性損傷的易感性3. 腎毒性損傷后的適應,三、中藥對腎臟的毒性及評價,(一）常見引起腎臟毒性的中藥 關

46、木通、草烏、雷公藤、斑蝥、土牛膝、巴豆、蜈蚣、蜂毒、朱砂、益母草、苦楝皮、防已、厚樸、花粉等 1. 含馬兜鈴酸類中藥引起的腎毒性 馬兜鈴酸（硝基菲類）的毒性機制，有細胞毒假說、腎缺血假說、免疫反應假說、AA-DNA加合物致病假說。,一般認為，馬兜鈴酸可能通過以下途徑導致各種腎損害：（1）短期內大劑量AA作用于腎小管上皮細胞，可致該細胞壞死及凋亡。（2）小劑量AA作用于腎小管上皮細胞，可使該細胞變性及萎縮，出現(xiàn)腎小管功

47、能障礙。（3）小劑量AA反復作用于腎小管上皮細胞，也可激活該細胞甚至使其活化，活化的腎小管上皮細胞可釋放TGF-β等因子，通過細胞間“串話”作用于腎間質成纖維細胞，使其激活分泌細胞外基質，導致腎間質纖維化，轉分化成纖維細胞，還能直接分泌細胞外基質，加重腎間質纖維化。,,（4）AA還能通過腎小管進入腎間質，直接刺激及激活間質成纖維細胞，分泌細胞外基質，導致腎間質成纖維化。2. 常見的引起腎毒性的中藥 光慈姑(秋水仙堿）、雷公藤（

48、甲、乙素）、蒼耳子（蒼耳苷、毒蛋白）、羊齒（莽草酸）、斑蝥（斑蝥素）、白降丹（氯化汞）,（二）腎毒性評價方法,1. 形態(tài)學檢查：大體解剖與稱重、鏡檢、電子顯微鏡2. 腎功能試驗：尿液收集、密度（或滲透壓）、蛋白尿、 尿糖、尿沉渣鏡檢 3. 血液生化分析：BUN、Cr4. 尿酶活性分析（LDH、ALP、LAP、NAG等）5. 腎臟清除功能試驗：GFR（腎小球濾過率）

49、 RPF（腎血流量）6. 腎小球-腎小管損傷標志物的組合分析7. 體外試驗：腎片、腎灌流技術、游離腎細胞,,（三）方法學評價 1. 方法學評價：整體實驗為主 2. 毒性評價；系列實驗,,神經系統(tǒng)毒性及安全性評價,,一、組織學及生理學基礎血-腦脊液屏障及腦的能量代謝特點耗氧量1/5，能量需求高二、神經系統(tǒng)的毒性反應及機制 （

50、一）神經系統(tǒng)的毒性反應：神經原、軸束、髓鞘（二）神經毒性的作用機制,（二）神經毒性的作用機制,1.神經遞質:遞質攝取和降解障礙,干擾儲存和釋放.2.受體:影響細胞內信號傳導.(鈣、CAMP/CGMP)3.膠質細胞:,三、中藥的神經毒性及安全性評價,(一）生物毒素的神經毒性作用中藥本身所含的生物堿、酸或其他有機成分具有神經毒性，如阿托品堿、天仙子胺、藏紅花堿。馬錢子，能引起驚厥、脊髓反射增強，以至失去對正常運動細胞刺激的抑制作用

51、。,,鬼臼毒素10-15mg/kg出現(xiàn)神經毒性作用，表現(xiàn)為脊髓前角運動神經元水腫，較嚴重的、長期性的損傷可出現(xiàn)在脊髓背角神經元、中樞神經軸突以及周圍神經系統(tǒng)，脊髓后根神經元表現(xiàn)為尼氏體消失。,,(二）重金屬毒性（1）中藥本身含重金屬藥，如朱砂（2）中藥重金屬殘留 鉛中毒的神經病變包括血管損害、腦水腫，且鉛對運動神經的毒性比感覺神經大。,,（三）中藥中的農藥殘留 （四）中藥神經毒性的評價 臨床評價:腦損害、顱

52、損害、脊髓損害、神經肌肉損害、 精神障礙。 動物研究：結構和神經病理學終點 神經生理學終點 神經毒的化學終點,,1.結構或神經病理學終點（1）大體形態(tài)變化，包括腦重量改變。（2）神經元或神經膠質的組織學改變（神經元病變、軸突病變、髓鞘病變）。 在細胞水平神經毒性作用表現(xiàn)為神經元的染色質溶解、空泡變、細胞死亡；軸突損傷

53、表現(xiàn)為軸突腫脹、變性和萎縮；而髓鞘改變可表現(xiàn)為折疊、水腫造成的撕裂、脫髓鞘。,,2.神經毒性的神經生理終點（1）神經傳導研究（2）感覺、運動及其他激發(fā)潛能研究（3）疾病發(fā)作和驚厥（4）腦電圖3.神經毒性物質的化學終點 影響神經元內的離子平衡；封閉神經遞質和其前體的回收；過度刺激受體；封閉神經遞質釋放；抑制遞質的合成和代謝酶。,,造血系統(tǒng)毒性及安全性評價,,一、組織學及生理學基礎(一）造血器官：胚胎期、出生后 (二

54、）血細胞的發(fā)育：造血干細胞階段、造血祖細胞階段、原始細胞及幼稚細胞階段 （三）造血調節(jié)：造血微環(huán)境、造血調節(jié)因子,二、造血系統(tǒng)毒性反應及機制(一）粒細胞減少癥和粒細胞缺乏癥 (二）再生障礙性貧血 （三）純紅細胞性再生障礙性貧血 （四）缺鐵性貧血 （五）溶血性貧血：免疫性、非免疫性 （六）血小板減少性紫癜 （七）過敏性紫癜 （八）彌散性血管內凝血 （九）藥物相關性白血病,三、中藥對造血系統(tǒng)的毒性及評價(一）中藥

55、對造血系統(tǒng)的毒性 粒細胞減少癥、粒細胞缺乏癥、再生障礙性貧血、純紅細胞性再生障礙性貧血、缺鐵性貧血、溶血性貧血、血小板減少癥,1.對粒系細胞的毒性（1）雷公藤急性粒細胞減少、血小板減少、紅細胞減少、再生障礙性貧血和彌散性血管內凝血等。雷公藤的毒性化學成分一般認為是生物堿及有細胞毒的二萜類環(huán)氧化合物。（2）青風藤引起粒細胞減少或粒細胞缺乏癥（3）八角蓮主要毒性成分為鬼臼毒素，可致血小板減少、白細胞減少。（4）光慈姑含

56、秋水仙堿等多種生物堿，抑制骨髓而導致粒細胞缺乏癥和再生障礙性貧血。,2.對紅系細胞的毒性（1）雄黃 可使紅細胞形態(tài)改變，并抑制白細胞的產生。機制可能與硫化砷（As2S2）進入體內和組織中的巰基結合干擾組織代謝，引起血細胞再生不良有關。（2）大黃 可引起缺鐵性貧血，主要是大黃所含鞣酸與鐵結合成不溶性復合物，妨礙了鐵的吸收以及大黃的導瀉作用干擾了鐵的吸收所致。,,（3）鉛丹 可引起溶血性貧血。鉛的溶血

57、作用與鉛抑制細胞膜ATP酶活性，妨礙水鈉調節(jié)，以及鉛與紅細胞的結合引起機械脆性增加等原因有關。（4）蜈蚣 含兩種類似蜂毒的有毒成分，即組胺樣物質和溶血性蛋白質，后者可引起溶血性貧血。,,3.對巨核系細胞的毒性（1）麝香、蟾酥對過敏性體質者可導致免疫反應，通過免疫機制破壞血小板（2）蝮蛇抗栓酶水解完整的血小板膜的磷脂。,,(二）造血系統(tǒng)毒性評價方法 一般血液學檢測及評價 骨髓造血功能檢測

58、及評價 （三）實驗動物的選擇 （四）中藥造血系統(tǒng)毒性的評價 粒系細胞、紅系細胞、巨核系細胞,,心血管毒性及安全評價,,一、病理生理基礎(一）心功能不全 影響因素：收縮性能、前負荷、后負荷、心率 (二）心律失常 電生理機制：沖動形成障礙、沖動傳導障礙 （三）脂質代謝失常,,二、心血管毒性反應及機制(一）心臟毒作用機制 干擾心肌細胞代謝

59、 心肌受體和遞質改變 缺氧的間接影響 (二）血管毒性的一般生化機制 引起血管栓塞的機制：對血管內皮的損害、對血小 板、對凝血因子的影響 （三）血管細胞毒性損傷機制,三、中藥對心血管的毒性及評價(一）蟾酥：慢纖維作用、心律失常、房室傳導阻滯 （二）藜蘆：神經毒、心臟毒性 能抑制心肌的興奮傳導，并具有反射性舒張血管的特征。

60、,（三）黃花夾竹桃：強心苷類物質的心臟毒性。 （四）烏頭堿：心血管系統(tǒng)損害（1）興奮迷走神經引起竇房結抑制，房室傳導阻滯，從而導致心率減慢；（2）直接作用于心肌，引起心肌興奮性增多，引起早搏、室速、室顫；（3）抑制血管運動中樞，引起血壓下降。,,（五）自然存在的物質：類固醇激素、細胞因子、動植物毒素（六）溶劑：異丙醇的CNS抑制（七）重金屬：鎘、鉛、鈷,,免疫毒性及安全性評價,,一、免疫系統(tǒng)組織學及生理學基礎(一）免

61、疫系統(tǒng)的組成：免疫器官 免疫細胞 免疫分子 (二）免疫應答：B細胞介導 T細胞介導 （三）免疫調節(jié) （四）主要組織相容性復合體 （五）免疫系統(tǒng)與神經系統(tǒng)、內分泌系統(tǒng)的關系,,二、免疫毒性反應及機制(一）免疫系統(tǒng)的敏感性 (二）免疫系統(tǒng)損傷的結果和機制

62、 超敏反應：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型 免疫抑制和宿主抵抗力降低 自身免疫性疾病 （三）中藥對免疫系統(tǒng)作用的特點 反應的靈敏性 反應的差異性 反應的復雜性,,三、免疫毒性及評價方法(一）體內評價方法 動物實驗 人類免疫毒理學 動物模型的應用 (二）體外研究

63、方法 細胞培養(yǎng)：鹽溶液、血清 中藥的體外免疫毒性研究 轉基因細胞,,(三）常用的試驗技術 1.病理學常規(guī)檢查 2.免疫細胞的檢測：淋巴細胞增殖試驗 細胞毒試驗 酶聯(lián)免疫斑點法 流式細

64、胞術 磁珠分離術 3.抗體的檢測 4.宿主抵抗力試驗：腫瘤細胞攻擊試驗 對病原體的抵抗試驗 5.細胞因子的檢測技術：生物活性檢測 免疫學檢測 核酸分子雜交

65、 PCR,,(四）免疫毒性的評價方案和判斷 1.評價方案 2.免疫毒性的綜合判斷 各檢測指標之間的關系 單味中藥或有效成分的毒性與復方的關系 體內、體外試驗的關系 動物毒性與人毒性的關系,,(五）中藥的免疫毒性 1.免疫器官毒性 2.巨噬細胞毒性 3.體液免

66、疫毒性 4.細胞免疫毒性 5.超敏反應,,生殖毒理及安全性評價,,,一、組織學及生理學基礎(一）生殖系統(tǒng)的組成：雄性、雌性生殖系統(tǒng)(二）生殖生理 二、生殖系統(tǒng)毒性反應及機制(一）生殖毒性的表現(xiàn)(二）生殖毒性作用機制：親性腺作用、親胚體作用、 親胎盤作用、胎期毒性、

67、 哺乳期毒性特點：損害的多樣性；生殖過程較其它系統(tǒng)損害的更敏感性； 損害不僅影響本身，亦影響后代,,三、中藥生殖毒性的評價 (一）整體動物 (二）動物選擇和劑量分組 （三）性激素水平檢測及性功能,,（四）雄性生殖毒性實驗 1. 睪丸功能檢測：精子生成分析 精子穿透試驗

68、 睪丸標志酶活性的測定 2. 系列交配試驗 3. 擴展交配試驗 4. 顯性致死試驗,,（五）雌性生殖毒性實驗 1. 卵巢功能檢測：陰道上片細胞涂片 壓片法 形態(tài)檢測 2. 生殖試驗 3.