新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容及要求

1、新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容與要求,西安萬隆制藥股份有限公司王震2012-3-26,第一章 新藥評價(jià)內(nèi)容,(一) 藥學(xué)研究與評價(jià)(二)臨床前藥理研究(三) 臨床前毒理學(xué)研究(四）臨床研究與評價(jià),(一) 藥學(xué)研究與評價(jià),名稱 結(jié)構(gòu)或組份 理化性質(zhì) 　原料藥生產(chǎn)工藝 　制劑處方及工藝 定性鑒別　　　 含量測定　雜質(zhì)檢查 　 原料藥和制劑的穩(wěn)定性 　 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案和起草說明　　包裝材料和容器的選擇依據(jù)及

2、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),(二)藥理研究,主要藥效學(xué)　　二種模型 量效關(guān)系 指標(biāo)客觀　　陽性對照 空白對照 時(shí)效關(guān)系 臨床給藥途徑 二種動物 　　體外試驗(yàn)至少重復(fù)3次　　作用機(jī)理 (全新藥),(三) 毒理學(xué)研究,一般藥理　　三個(gè)劑量 臨床途徑 時(shí)效變化 　神經(jīng)系統(tǒng) 心血管系統(tǒng) 呼吸系統(tǒng)藥代動力學(xué)　　三個(gè)劑量 二種動物 臨床途徑 8～12個(gè)采樣點(diǎn)　　藥動學(xué)基本參數(shù) 方法學(xué)考證　　分布排泄急性毒性

3、 毒性癥狀 LD50，二種動物 二種途徑 長期毒性 三個(gè)劑量 臨床途徑 空白對照，動態(tài)觀察 中毒癥狀 中毒劑量 動物選擇　指標(biāo)測定　二種動物 靶 器 官 安全劑量　毒性性質(zhì) 病理描述 病理照片 統(tǒng)計(jì)處理毒代動力學(xué) 三個(gè)劑量 6-8點(diǎn) 主要毒代參數(shù) AUC Cmax Tmax特殊毒性 遺傳 生殖 致癌性局部毒性 過敏 刺激 光毒 溶血免疫毒性 (生物制品

4、)依 賴 性 作用于CNS藥物,第二章、毒理學(xué)研究,一、毒理學(xué)研究的意義 二、毒理學(xué)研究的內(nèi)容及方法 三、急性毒性研究 四、長期毒性研究 五、其他毒性研究 六、特殊毒性研究 七、毒代動力學(xué)研究,一、毒理學(xué)研究的意義,1、毒理學(xué)研究簡介2、創(chuàng)新藥物的基本要求3、20世紀(jì)重大藥害事件4、已審批藥物的副作用與從市場撤出舉例5、安全性因素對藥物研發(fā)的影響,---------------------------------

5、------------------------- 致癌性 遺傳毒性 生殖毒性

6、 局部耐受性、過敏、 依賴性、免疫毒性 光敏和其它試驗(yàn)等 了解毒性反應(yīng)劑量、時(shí)間、強(qiáng)度、癥狀、靶器官及可逆性等， 為臨床方案提供參考、預(yù)測出現(xiàn)的毒性

7、反應(yīng)，制訂臨床防護(hù) 措施、保證受試者用藥安全,毒理學(xué)研究,局部用藥毒性,全身用藥毒性,,,,,發(fā)現(xiàn)毒理學(xué),一般毒性,特殊毒性,,,,,,,目的,2.創(chuàng)新藥物的基本要求,,,,,,質(zhì)控,安全,有效,藥物的基本屬性（安全性、有效性、穩(wěn)定性、可控性），在一定意義上，由藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)所決定 藥物分子設(shè)計(jì)是實(shí)現(xiàn)新藥創(chuàng)制的主要途徑和手段,穩(wěn)定,3、20世紀(jì)重大藥害事件,甘 汞： 汞中毒 死亡5

8、85人醋 酸 鉈： 鉈中毒 死亡1萬人氨基比林： 粒細(xì)胞缺乏癥 死亡2082人磺 胺 酏： 肝腎損害 死亡107人非那西?。?腎損害、溶血 死亡500人碘二乙基錫： 神經(jīng)毒性、腦炎、失明 死亡110人反 應(yīng) 停： 海豹樣畸形兒10000多 死亡5000人異丙腎氣霧劑：嚴(yán)重心律失常、心衰，

9、 死亡3500人氯碘喹啉： 骨髓變性、失明、受害7856人，死亡5%心 得 寧： 眼-皮膚-粘膜綜合征， 受害2257人,4、已審批藥物的副作用與從市場撤出舉例（1990-）,5、安全性因素對藥物研發(fā)的影響,二、毒理學(xué)研究的內(nèi)容及方法,1、GLP－國際上安全性研究實(shí)驗(yàn)室共同遵循的規(guī)范2、臨床前藥物安全性評價(jià)的主要內(nèi)容3、新藥臨床前安全性評價(jià)的利弊權(quán)衡4、新藥臨床安全性再評價(jià)的目的5、新藥臨床試驗(yàn)安全性評價(jià)的局限

10、性 6、2007年10大藥物不良反應(yīng)事件回顧7、藥物臨床安全性再評價(jià)主要內(nèi)容8、新藥臨床階段安全性評價(jià)利弊權(quán)衡9、藥物上市后再評價(jià)的目的10、藥物上市后風(fēng)險(xiǎn)的主要來源11、藥物的毒副作用與從市場撤出舉例,1、GLP－國際上安全性研究實(shí)驗(yàn)室共同遵循的規(guī)范,,,提高藥品非臨床研究的質(zhì)量；確保實(shí)驗(yàn)資料的真實(shí)性、完整性和可靠性；提高科學(xué)數(shù)據(jù)的質(zhì)量和有效性，促進(jìn)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的國家間相互認(rèn)可；保證人民用藥安全，為人類健康服務(wù)。,2、

11、臨床前藥物安全性評價(jià)的主要內(nèi)容,單次給藥毒性試驗(yàn)（急性毒性試驗(yàn)）重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)（長期毒性試驗(yàn)）遺傳毒性試驗(yàn)生殖毒性試驗(yàn)安全性藥理學(xué)試驗(yàn)（一般藥理學(xué)）致癌性試驗(yàn)藥物依賴性試驗(yàn)特殊毒性試驗(yàn)（過敏性、局部刺激性、溶血性）等免疫原性試驗(yàn)毒代動力學(xué)實(shí)驗(yàn),臨床前研究結(jié)果評估：利－是指藥效或療效，弊－是指毒性或毒副作用毒性特點(diǎn)：（主要癥狀、毒性大小、靶器官、可逆性）安全范圍：（LD50/ED50、LOAEL、NOAEL）LO

12、AEL(lowest-observed-adverse-effect-level )出現(xiàn)副反應(yīng)的最小劑量NOAEL（No Observed Adverse Effect Level）無可見有害作用水平同類藥比較：了解程度及優(yōu)勢（有效性和安全性）適應(yīng)癥背景：治療譜、毒性大小（安全范圍）、性質(zhì)和早期可預(yù)測性人體相關(guān)性：注意量化（毒代暴露量）利弊權(quán)衡－是一個(gè)綜合性的評價(jià)過程（系統(tǒng)工程）,3、新藥臨床前安全性評價(jià)的利弊權(quán)衡,4、新藥

13、臨床安全性再評價(jià)的目的,臨床前研究結(jié)果并不能完全推測臨床研究結(jié)果，動物模型也不能完全復(fù)制出人體發(fā)生的疾病。臨床中存在聯(lián)合用藥產(chǎn)生藥物相互作用問題。藥物在臨床使用中發(fā)現(xiàn)毒副作用，需進(jìn)行毒性機(jī)制研究尋找解毒藥物。部分試驗(yàn)可以在藥物進(jìn)行臨床研究中才開始進(jìn)行。臨床研究中有時(shí)會出現(xiàn)藥物引起的特異質(zhì)毒性反應(yīng)。特需藥品免做臨床前安全性評價(jià)研究的藥物。,藥品上市前動物毒性研究的局限性藥品上市前人體臨床試驗(yàn)倫理范圍的局限性藥品上市

14、前人體臨床試驗(yàn)科學(xué)性研究的局限性 統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，在所有的藥物臨床試驗(yàn)與應(yīng)用中，不良反應(yīng)種類出現(xiàn)的概率是：在一般動物毒性試驗(yàn)中只占３５％左右；在Ⅰ期人體耐受試驗(yàn)中只有２０％；在Ⅱ、Ⅲ期臨床試驗(yàn)的出現(xiàn)率是３５％；在Ⅳ期臨床試驗(yàn)時(shí)出現(xiàn)７０％；到市場銷售時(shí)全部副作用才陸續(xù)出現(xiàn)。,5、新藥臨床試驗(yàn)安全性評價(jià)的局限性,6、2007年10大藥物不良反應(yīng)事件回顧,頭孢曲松鈉的安全使用問題（與鈣使用，嬰兒死亡）靜脈輸注人免疫球蛋白引起丙

15、肝抗體陽性率增加甲磺酸培高利特撤市（心臟瓣膜病） 馬來酸替加色羅撤市(心肌梗死、腦卒中）含釓造影劑的安全問題（腎源性纖維化?。┝_格列酮的安全性受質(zhì)疑（心梗和心源性死亡）注射用甲氨蝶呤、阿糖胞苷中混入長春新堿（N受損）感冒藥禁用于2歲或以下兒童（死亡）哺乳婦女服用可待因可能導(dǎo)致嬰兒發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)硫酸普羅寧與胸腺肽注射劑可引起嚴(yán)重不良反應(yīng),7、藥物臨床安全性再評價(jià)主要內(nèi)容,藥物毒性作用靶器官、藥物毒性作用模型的研究

16、解決由于模型不合適而發(fā)生的不良反應(yīng)，重新設(shè)計(jì)動 物模型評價(jià)藥物的毒性作用藥物毒性作用機(jī)制 解決小概率毒性作用藥物的不良反應(yīng)，評價(jià)沒有動物 模型不良反應(yīng)藥物的毒性作用聯(lián)合用藥的作用機(jī)制篩選研究 解決臨床上由于聯(lián)合用藥而發(fā)生的不良反應(yīng)根據(jù)新藥特點(diǎn)，可在臨床階段提供新藥安全性資料 致突變試驗(yàn)、 致癌性試驗(yàn)和III段生殖試驗(yàn)，一般可 以在申報(bào)NDA時(shí)提供其研究資料,8、新藥臨床階段安全性評價(jià)利弊權(quán)

17、衡,評估臨床已出現(xiàn)的毒性，和毒性特點(diǎn)以及監(jiān)測、防治措施。確定進(jìn)一步臨床和劑量選擇方案提供重要信息。綜合相關(guān)信息進(jìn)行利弊權(quán)衡，判斷能否向臨床推進(jìn)。根據(jù)毒理結(jié)果調(diào)整臨床適應(yīng)癥范圍、適應(yīng)人群或給藥方案綜合比較新藥與已上市藥物之間毒副作用與安全性之間的關(guān)系，分析與判斷該新藥上市的可能性。,9、藥物上市后再評價(jià)的目的,新藥上市前安全性評價(jià)的局限性 病例太少、研究時(shí)間太短、試驗(yàn)對象年齡范圍太窄、用藥對象條件控制太嚴(yán)藥物副反應(yīng)與

18、安全性的關(guān)系 副作用、變態(tài)反應(yīng)、特異質(zhì)反應(yīng)、藥物依賴性、致癌、致突變、致畸作用老藥的毒、副作用研發(fā)成新藥的可能性 反應(yīng)停、長春新堿、阿托品、阿斯匹林、 雌激素藥物再評價(jià)與藥物命運(yùn)的關(guān)系 限制與撤出使用、醫(yī)療事故判斷的依據(jù),10.藥物上市后風(fēng)險(xiǎn)的主要來源,11.藥物的毒副作用與從市場撤出舉例（1990-）,12.非臨床安全性評價(jià)基本原則,,把握藥理毒理評價(jià)的系統(tǒng)性 充分暴露毒性 具體問題具體分析

19、 執(zhí)行GLP（藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范）,13.非臨床安全性評價(jià)全過程質(zhì)量管理,GRP-Good Reviewing PracticeGSP-Good Supply Practice GUP-Good Using PracticeGSSP-Good Storage And Shipping Practice,GMP-Good Manufacturing PracticeGLP-Good Laborat

20、ary PracticeGCP-Good Clinical Practice,藥物相關(guān)的GXP管理,藥物儲存,,,,GSSP,14、藥物安全性評價(jià)最終目的－為臨床服務(wù),初步目的– 毒理試驗(yàn)本身（試驗(yàn)評價(jià)）1. 毒性反應(yīng)（定性和定量）劑量、時(shí)間、程度、癥狀、性質(zhì)、靶器官以及損傷的可逆性2. 安全劑量及安全范圍 最終目的—向臨床過渡（綜合評價(jià)）申報(bào)臨床： 1. 預(yù)測人臨床用藥時(shí)的可能毒性，以制定監(jiān)測、防治措施 2. 推算

21、臨床研究的安全參考劑量和安全范圍，進(jìn)行利弊權(quán)衡申報(bào)生產(chǎn)：3.為說明書提供信息--尤其是那些無法在人體試驗(yàn)的動物結(jié)果，限制用藥人群，幫助利弊權(quán)衡。,21/24/26號: 過敏性（局部、全身和光敏毒性）、／ 溶血 性和局部（血管、皮膚、粘膜、肌肉等）刺激 性等主要與局部、全身給藥有關(guān)的特殊安全性 試驗(yàn)研究和文獻(xiàn)資料22/ /27號: 復(fù)方制劑中多種成

22、/組份藥效、毒性、 藥代動 力學(xué)相互影響的試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料23/25/22號: 致突變試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料24/26/23號: 生殖毒性試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料25/27/24號: 致癌試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料26/ /28號: 依賴性試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料27/28/21號: 動物藥代動力學(xué)試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料,15、各類新藥申報(bào)資料的一般要求,16、《藥品注冊管理辦法》藥品注冊藥理毒理申報(bào)資料,藥理毒理研究資料

23、綜述主要藥效學(xué)試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料一般藥理學(xué)的試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料－（ＧＬＰ）急性毒性試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料－（ＧＬＰ）長期毒性試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料－（ＧＬＰ）過敏性（局部、全身、和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、皮膚、粘膜、肌肉等）刺激性等特殊安全性試驗(yàn)資料和文獻(xiàn)資料－（ＧＬＰ）復(fù)方制劑中多種成分藥效、毒性、藥代動力學(xué)相互影響的試驗(yàn)資料和文獻(xiàn)資料致突變試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料－（ＧＬＰ）生殖毒性試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料－（ＧＬＰ）致癌試驗(yàn)

24、資料及文獻(xiàn)資料－（ＧＬＰ）依賴性試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料－（ＧＬＰ）非臨床藥代動力學(xué)試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料－（ＧＬＰ）,17.臨床前安全性評價(jià) 與臨床的差別,,18、長期毒性試驗(yàn)的給藥期限,19.安評資料審評中的主要問題,（一）受試物 （二）試驗(yàn)動物 （三）給藥途徑 （四）給藥頻率 （五）給藥期限 （六）給藥劑量 （七）觀察指標(biāo) （八）觀察指標(biāo)的時(shí)間和次數(shù) （九）結(jié)

25、果及分析 （十）綜合評價(jià),急性（單次給藥）毒性 長期（重復(fù)給藥）毒性 致突變（遺傳毒性） 生殖毒性 致癌性 免疫原性 依賴性 毒代動力學(xué) 其它毒性（過敏性、溶血性、光毒性、免疫毒性、藥物依賴性等試驗(yàn)）,20、藥物安全性評價(jià)研究的范圍,受試藥物化學(xué)藥品：原料、制劑生物制品：制劑中藥：原料、制劑、浸膏試驗(yàn)動物 動物同藥效試驗(yàn) 嚙齒類和非嚙齒類兩種，如大鼠、犬或猴等。 理由充分，一種相關(guān)

26、動物,21.藥物非臨床研究-共性問題,22.臨床前毒理學(xué)評價(jià)總的要求,找出毒性劑量 Toxic dosage確定安全劑量范圍 Safety margin 毒性反應(yīng) Toxic reaction: 性質(zhì)、程度、量毒關(guān)系、產(chǎn)生時(shí)間，達(dá)峰時(shí)間, 持續(xù)時(shí)間及反復(fù)產(chǎn)生毒性反應(yīng)時(shí)間、遲發(fā)性、蓄積性、耐受性 尋找毒性反應(yīng)靶器官 Target Organ 毒性反應(yīng)是否可逆 Reversibility?確保臨床用藥安全,（一）試驗(yàn)要求（

27、二）目的意義（三）基本內(nèi)容和要求（四）急性毒性LD50常用計(jì)算方法（五）有關(guān)問題,三、急性毒性試驗(yàn),（一）試驗(yàn)要求,試驗(yàn)動物嚙齒類----小鼠或大鼠 非嚙齒類----犬或其它一類藥至少必須用二種動物(嚙齒類及非嚙齒類各一種, 其中非嚙齒類宜用Beagle犬); 其它類酌情用二種動物小鼠18-22g, 同次體重相差不超過4g; 大鼠120-150g, 同次體重不超過20g; 犬用成年犬♀♂各半,（二）急性毒性試驗(yàn)?zāi)?/p>

28、的意義,1、了解新藥急性毒性強(qiáng)度 2、計(jì)算新藥相對毒性參數(shù) 3、為臨床毒副反應(yīng)監(jiān)護(hù)提供參考依據(jù) 4、為長期毒性、蓄積性毒性提供依據(jù) 5、為特殊毒性試驗(yàn)選擇劑量提供依據(jù)6、其它方面,1、新藥急性毒性的強(qiáng)度,表. 化學(xué)物質(zhì)的急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)(WHO, 1977)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━毒性分級 ig大、小鼠LD50 吸入大、小鼠LC50 涂皮兔LD50 人口服可能的

29、 (mg/kg) (ppm) (mg/kg) 致死量(g)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━極 毒 5000 >10000 >2180 >1200━━━━━━━━━━

30、━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ *吸入毒性LC50指中毒欄中的濃度, 一次中毒2-4小時(shí), 觀察24天,新藥急性毒性的強(qiáng)度,表. 歐共體對化學(xué)物的毒性分級━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━動物及給藥途徑 劇 毒 毒 有 害━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━大鼠 LD50 ig(mg/kg) ≤25

31、 25-200 200-2000大鼠或兔經(jīng)皮LD50 (mg/kg) ≤50 50-400 400-2000大鼠 LC50 (mg/L/4h ≤0.5 0.2-2 2-20 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━,2、相對毒性參數(shù),治療指數(shù)TI =LD50/ED50安全系數(shù)SF=LD5/ED95可靠或確實(shí)安全系數(shù)CSF =LD1/ED

32、99安全范圍SM=(LD1/ED99-1) X 100%SED50/ED50, 越大越安全LD5基本無害量　 ED95基本有效量LD1肯定無害量　 ED99肯定有效量,3.為臨床毒副反應(yīng)監(jiān)護(hù)提供參考,中毒癥狀起始時(shí)間持續(xù)時(shí)間恢復(fù)時(shí)間對抗試驗(yàn)為臨床急救提供依據(jù),急性毒性試驗(yàn)觀察動物反應(yīng)指標(biāo),中 毒 部 位 　　 毒 性 癥 狀 表 現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng) 　 呆滯:對刺激

33、反應(yīng)遲緩、減弱、消失；不安：對刺激反應(yīng) 過敏、 興奮；強(qiáng)直：行動姿勢改變、叫聲異常、震顫、 共濟(jì)失調(diào) 植物神經(jīng)系統(tǒng)　　 瞳孔縮小、放大; 分泌增多，如流涎、流淚 呼 吸 系 統(tǒng) 鼻孔流鼻涕、呼吸緩慢、困難、潮式呼吸、速率加快等心血管 系統(tǒng)　 　心動過速、緩慢、心律不齊、心跳過強(qiáng)、微弱胃 腸 系 統(tǒng) 　

34、脹、腹瀉、便秘、糞便不成形、糞便黑色生 殖 系 統(tǒng)　　 乳腺膨脹、會陰部污濁、陰囊下垂等皮膚、 毛　　皮膚發(fā)紅、松弛、皮疹、毛豎起粘 膜　　口腔流粘液、充血、潰瘍、出血性紫紺眼 睛　　上瞼下垂、眼球突出混濁其 他　　直腸溫度升高、降低；消瘦；拒食等,4、為長毒、蓄毒試驗(yàn) 選擇劑量提供依據(jù),長期毒性劑量設(shè)計(jì)LD50法 (1/10, 1/50, 1/

35、100)MTD法 (1, 1/3, 1/10)蓄積性毒性劑量設(shè)計(jì)1/10LD50, 然后按等比級數(shù)1.5倍逐漸遞增,5、為特殊毒性試驗(yàn)選擇劑量提供依據(jù),生殖毒性試驗(yàn)高劑量為母鼠MTD致突變試驗(yàn)嚙齒類動物微核試驗(yàn)高劑量為1/2 LD50果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)的高、低劑量分別為1/2 LD50和1/4 LD50精原細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)高劑量應(yīng)為1/2 LD50 動物短期致癌試驗(yàn)高劑量應(yīng)是MTD主要藥效學(xué)劑量限度、一般藥理學(xué)和藥

36、動學(xué)劑量設(shè)計(jì)也要參考急性毒性的LD50,6、其它方面,系列化合物的合格率分析(除理化性質(zhì)為主外)也參考LD50復(fù)方中藥物的相互作用, 有時(shí)也通過拆方及合用的LD50來判別相互作用的性質(zhì),四、長期毒性試驗(yàn),（一）目的意義（二）基本內(nèi)容和要求 1、LD50試驗(yàn) 2、最大耐受量試驗(yàn) 3、最大給藥量試驗(yàn) 4、限量試驗(yàn)（三）長期毒性研究目的（四）試驗(yàn)方案設(shè)計(jì) 1-基本原則 2-試驗(yàn)動物

37、 3-給藥方案,（一）目的意義,毒性劑量 Toxic dosage安全范圍 Safety margin 毒性反應(yīng) Toxic reaction: 性質(zhì)、程度、量毒關(guān)系、產(chǎn)生時(shí)間，達(dá)峰時(shí)間, 持續(xù)時(shí)間及反復(fù)產(chǎn)生毒性反應(yīng)時(shí)間、遲發(fā)性、蓄積性、耐受性 毒性反應(yīng)靶器官 Target organ 毒性反應(yīng)是否可逆 Reversibility,1-LD50試驗(yàn)指動物單次給藥后引起50％動物死亡的劑量。LD50值的意義是：LD50

38、越小表示藥物的急性毒性越大。 動物：小鼠、大鼠等 動物與分組：一般5組；每組10只 雌、雄各半。試驗(yàn)前禁食 給藥途徑：臨床給藥途徑 觀察14天，進(jìn)行大體解剖觀察，如有改變 - 病理檢查,（二）基本內(nèi)容和要求,2 -最大耐受量試驗(yàn) （MTD--Maximum-Tolerated Dose ）指動物單次大劑量給藥或在24小時(shí)內(nèi)接受多次大劑量

39、受試藥物后，動物在短期內(nèi)出現(xiàn)的與藥物相關(guān)的毒性反應(yīng)，但是又不引起動物死亡的最大劑量 動物：小鼠、大鼠、犬等 動物數(shù)： 小動物20只；大動物4只 雌、雄各半。試驗(yàn)前動物應(yīng)注意禁食 給藥途徑：臨床給藥途徑 觀察14天，進(jìn)行大體解剖觀察，如有改變 - 病理檢查,（二）基本內(nèi)容和要求,該試驗(yàn)多用于中藥和毒性較小的其它藥物研究 指藥物以最高濃度和最大容積的給藥，劑

40、量可能并未達(dá)到最大耐受的劑量，所以該劑量被稱為最大給藥量。 具體要求可參照最大耐受量試驗(yàn)。 低毒藥物，口服給藥：5g（或ml）/kg 動物數(shù)一般≥ 5只，大鼠禁食一夜，小鼠禁食4－6小時(shí)，觀察14天，如無死亡，則無必要進(jìn)行更高劑量 如動物在5g/kg出現(xiàn)死亡，可選擇較低劑量,3、最大給藥量試驗(yàn),4、限量試驗(yàn),（二）基本內(nèi)容和要求,觀察動物在給予超過臨床劑量（數(shù)倍或數(shù)十倍）和用藥周期（3-4倍以上）

41、的情況下所出現(xiàn)的毒性反應(yīng) 設(shè)法發(fā)現(xiàn)引起毒性反應(yīng)的劑量、劑量與毒性之間的關(guān)系、中毒表現(xiàn)和程度、主要毒性靶器官或組織及可逆程度等預(yù)測臨床研究階段可能的安全范圍和毒性，預(yù)先制定防治措施或避免某些有特殊疾病患者的使用，減少臨床可能的風(fēng)險(xiǎn)為臨床試驗(yàn)初始劑量和指標(biāo)的選擇等提供重要參數(shù),（三）長期毒性研究目的,通常長毒始于主要藥效、安全藥理、單次給藥毒性、初步藥代動力學(xué)（如果已經(jīng)可獲得）等試驗(yàn)之后有些藥物側(cè)重比較毒理學(xué)的研究，如新的劑型、改變

42、酸根或堿基、改變給藥途徑等。,（四）試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)-基本原則,l    動物的種類 常用大鼠和犬或敏感動物。創(chuàng)新藥一般2種以上，雌雄各半。生物制品多用大鼠和猴（種屬特異性可特殊）   動物的年齡與數(shù)量 大鼠試驗(yàn)3月內(nèi)：6-8周齡；>3月：5-6周齡 犬：一般選用性成熟的，6-10月；猴：3.5-4.5年 根據(jù)試驗(yàn)周期長短確定

43、每組動物數(shù)。原則：試驗(yàn)結(jié)束時(shí)小動物每組動物數(shù)應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求； 大動物的數(shù)應(yīng)滿足毒理學(xué)評價(jià)要求； 一般大鼠為10-30只，雌雄各半；犬、猴至少雌、雄各3只；毒性大、周期長數(shù)量應(yīng)增加，考慮恢復(fù)期數(shù)量。,（四）試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)—實(shí)驗(yàn)動物,給藥時(shí)間臨床給藥周期的3-4倍。反復(fù)、長期或植入的藥， 按最長給藥時(shí)間，即嚙齒- 6月；非嚙齒-9月 周期短 - 每天給藥；>1個(gè)月- 6天/周

44、 - 每天給藥時(shí)間應(yīng)一致 - 保證動物攝入量的準(zhǔn)確性 中藥如給藥體積大，可將藥物分成 2次/日 - 不提倡采用摻食給藥，除非有穩(wěn)定性、均一性,（四）試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)—給藥方案,給藥劑量 一般3個(gè)給藥劑量組 高劑量 - 動物應(yīng)出現(xiàn)毒性和個(gè)別死亡（<20%） 低劑量 - 等于或略高于有效劑量 ，無毒性 中劑量 - 介于以上兩者之間 ，輕微毒性 或者按急毒結(jié)果：

45、 LD50法 (1/10, 1/50, 1/100) MTD法 (1, 1/3, 1/10),（四）試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)—給藥方案,對照組的設(shè)置 - 通常給藥組和對照組的動物數(shù)應(yīng)基本相等 - 對照組可根據(jù)試驗(yàn)方案的具體要求和研究目的設(shè)立 陰性對照組、溶媒對照組觀察指標(biāo) 全面、針對特點(diǎn) 一般體征、飲食、體重變化；血尿常規(guī)、血液及血液生化指標(biāo)、心電圖，臟器/體重系數(shù)、重要組織

46、器官的肉眼和病理組織學(xué)觀察、死亡情況。應(yīng)記錄毒性癥狀出現(xiàn)、減輕或消失的時(shí)間。體重和進(jìn)食量每周測1-2次。 周期>3月的，1/3動物檢查中期主要指標(biāo)； 如發(fā)現(xiàn)異?？蛇m當(dāng)增加檢查次數(shù)。,（四）試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)—給藥方案,五、其他毒性研究,1、致突變性試驗(yàn)2、生殖毒性試驗(yàn)3、致癌性試驗(yàn)4、皮膚給藥急性毒性試驗(yàn) 5、皮膚給藥的長期毒性試驗(yàn)6、皮膚刺激試驗(yàn)7、皮膚過敏試驗(yàn)8、光敏試驗(yàn)9 、眼刺激試驗(yàn)10、滴

47、鼻劑和吸入劑急性毒性試驗(yàn)11、直腸、陰道用藥急毒試驗(yàn)12、直腸、陰道用藥刺激試驗(yàn)13、身體依賴性試驗(yàn)-自然戒斷試驗(yàn)14、身體依賴性試驗(yàn)--替代試驗(yàn)15、身體依賴性試驗(yàn)--催促試驗(yàn)16、身體依賴性試驗(yàn)--誘導(dǎo)試驗(yàn)17、精神依賴性試驗(yàn),目前建立的遺傳毒性試驗(yàn)是研究機(jī)體遺傳物質(zhì)受外源性化學(xué)物質(zhì)或其它環(huán)境因素作用時(shí)對有機(jī)體產(chǎn)生的遺傳毒性作用。遺傳毒性試驗(yàn)包括體外和體內(nèi)檢測系統(tǒng)。兩者應(yīng)結(jié)合進(jìn)行研究。體外檢測系統(tǒng)包括細(xì)菌回復(fù)突變、

48、微核試驗(yàn)、哺乳動物細(xì)胞染色體畸變等；體內(nèi)試驗(yàn)包括骨髓微核試驗(yàn)、顯性致死試驗(yàn)等。一類藥需要提供實(shí)驗(yàn)資料,1、致突變性試驗(yàn)（遺傳毒性）,概念 評價(jià)藥物對哺乳動物生殖的影響，推測對人可能的生殖毒性研究分為三段 I段（一般生殖毒性）：是評價(jià)對成年動物生育力和早期胚胎發(fā)育影響，評價(jià)藥物對配子成熟，交配行為、受孕、胚胎著床前和著床的影響 II段（致畸敏感期毒性）：即妊娠動物在胚胎器官形成期給藥，評價(jià)藥物對親體、胚胎、胎

49、仔發(fā)育影響 III段（圍產(chǎn)期毒性）：在妊娠動物分娩前后給藥，評價(jià)胎仔出生前后的發(fā)育和孕鼠從妊娠后期至斷奶期間給藥對妊娠、分娩、哺乳、胚胎、胎仔發(fā)育的影響。根據(jù)臨床用藥次數(shù)、適應(yīng)證和擬用人群決定是否進(jìn)行該試驗(yàn)創(chuàng)新藥，一般可在申報(bào)臨床研究前先提供II段試驗(yàn)對于可能只給一次或終身一次（如診斷或外科手術(shù)）的藥，重復(fù)給藥研究也許是不必要的。在較高劑量下，縮短處理期似乎更合適。,2、生殖毒性試驗(yàn),致癌試驗(yàn)檢測受試藥物對動物的潛在

50、致瘤性藥物是否進(jìn)行該試驗(yàn)應(yīng)在獲得一定的相關(guān)信息后才能確定 人群最長用藥的時(shí)間及遺傳毒理學(xué)、重復(fù)給藥毒性等相關(guān)結(jié)果 重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)可能顯示受試藥物具有免疫抑制特性、激素活性或 考慮對人類是一種危險(xiǎn)因子時(shí)，都應(yīng)慎重考慮進(jìn)行有關(guān)的致癌試驗(yàn)。如：-藥物擬用于非腫瘤病人的輔助治療或非癌癥疾病的重復(fù)給藥使用 - 臨床連續(xù)給藥時(shí)間大于6個(gè)月應(yīng)進(jìn)行該試驗(yàn) - 治療慢性和復(fù)發(fā)性疾病而經(jīng)常間斷

51、使用藥物 - 有明確遺傳毒性的化合物； - 其構(gòu)效關(guān)系提示有潛在的致癌性的藥物 - 在連續(xù)重復(fù)給藥的毒性試驗(yàn)中有癌前期病變的證據(jù) - 重復(fù)給藥滯留的母體化合物或其代謝產(chǎn)物導(dǎo)致局部組織或病生理改變 - 較長時(shí)間接觸的藥物，如緩慢釋放藥物也應(yīng)考慮進(jìn)行該試驗(yàn) - 內(nèi)源性肽類、蛋白質(zhì)是否需要進(jìn)行該研究需作特殊考慮 - 超生理水平,3-1、致癌性試驗(yàn),以下情況進(jìn)行致癌試驗(yàn)尤為重要：1）產(chǎn)

52、生的生物學(xué)作用與天然產(chǎn)物明顯不同；2）由于修飾導(dǎo)致產(chǎn)品結(jié)構(gòu)與天然產(chǎn)物相比有明顯不同；3）在人體局部或全身的濃度（即藥理學(xué)水平）明顯增加。對于抗腫瘤藥物是否進(jìn)行該試驗(yàn)，可考慮以下因素： - 如果用藥人群的生存期較短（2－3年），則不要求 - 如用于晚期全身治療的抗腫瘤藥物一般不需要進(jìn)行 ，但當(dāng)該藥物療效較好，能明顯延長生命時(shí)，應(yīng)考 慮有關(guān)繼發(fā)性腫瘤的問題，應(yīng)進(jìn)行致癌性研究,3-2、致癌性試驗(yàn),目的: 觀

53、察短期接觸受試物后皮膚的毒性反應(yīng)動物: 家兔、豚鼠或大鼠，♀♂各半，家兔體重２kg,豚鼠300g, 大鼠200g左右, 給藥前24h將動物背部脊柱兩側(cè)毛脫掉, 去毛范圍約相當(dāng)于體表面積的10%左右, (家兔約150cm2左右, 豚鼠、大鼠約40cm2左右）藥物：膏劑、液體或粉末。粉末需用賦形劑（如羊毛脂、凡士林等）混勻，以保證受試物與皮膚有良好的接觸劑量：3個(gè)，組距0.65－0.85。家兔每組４只，豚鼠或大鼠每組10只并設(shè)賦形劑或

54、空白對照組方法：將受試物均勻涂敷于脫毛區(qū)，破損皮膚則在脫毛區(qū)劃破皮膚后再涂敷受試物。24h后去除，每日觀察，連續(xù)7-14天。觀察動物體重、皮膚、毛發(fā)、眼睛和粘膜的變化，呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等變化。若有死亡則進(jìn)行尸檢，當(dāng)有肉眼可見病變，則需進(jìn)行病檢判斷：試驗(yàn)結(jié)果與對照組比較判斷,4、皮膚給藥急性毒性試驗(yàn),5.皮膚給藥的長期毒性試驗(yàn),目的：觀察經(jīng)皮滲透產(chǎn)生的異常反應(yīng)和可逆程度，找到靶器官動物：家兔(2kg, 6只/組)，

55、豚鼠(300g，10只/組)或大鼠(200g，10只/組)，♀♂各半。給藥前24h動物背部脊柱兩側(cè)脫毛，面積同急毒受試物：同急性毒性試驗(yàn)劑量：３個(gè)，要求同大鼠口服長毒試驗(yàn)，并設(shè)賦形劑或空白對照組，若用受試物劑量超過有效濃度20倍以上，仍未見動物有不良反應(yīng)或死亡時(shí)，則只須設(shè)一個(gè)高劑量組方法：受試物均勻涂敷, 每次至少接觸６h，臨床用藥療程的３倍以上時(shí)間連續(xù)給藥。部分動物應(yīng)于停藥后繼續(xù)觀察１-２周，檢測指標(biāo)：除每日觀察皮膚、臨床變化

56、及皮膚病理學(xué)檢查外，其血液學(xué)、血液生化指標(biāo)和病理學(xué)檢查項(xiàng)目同大鼠長期毒性試驗(yàn)要求判斷：實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)寫明安全劑量、中毒劑量、中毒表現(xiàn)、中毒靶器官及中毒的可逆程度等,6、皮膚刺激試驗(yàn),目的：觀察刺激反應(yīng)情況動物：首選家兔(2kg左右)，其次為豚鼠(300g左右)。藥前24h脫毛，家兔每側(cè)脫約50cm2，豚鼠每側(cè)脫約20cm2受試物：同急性毒性試驗(yàn)方法：≥３只家兔或５只豚鼠，在受試物區(qū)、對照區(qū)和破損皮膚區(qū)（脫毛后），一次或多次將受試物１

57、ml或1 g涂于受試物區(qū)，賦形劑則涂于對照區(qū)。24h后去除。觀察1、24、48和72h涂抹部位有無紅斑和水腫等，變化的恢復(fù)情況和時(shí)間多次給藥則每日涂抹一次，連續(xù)一周，其余均與一次給受試物的方法和要求一致結(jié)果評價(jià)：每只動物試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行刺激反應(yīng)評分，計(jì)算出平均分值進(jìn)行刺激強(qiáng)度評價(jià),皮膚刺激反應(yīng)評分,━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 刺激反應(yīng)

58、 分值━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━紅斑: 無紅斑 0 勉強(qiáng)可見

59、 1 中度紅斑 2 嚴(yán)重紅斑 3 紫紅色紅斑并有焦痂形成 4

60、水腫: 無水腫 0 勉強(qiáng)可見 1 皮膚隆起輪廓清楚

61、 2 水腫隆起約1mm并范圍擴(kuò)大 4━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━,皮膚刺激強(qiáng)度評價(jià),━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 強(qiáng)度 分值━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 無刺激性

62、 6.0━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━,7、皮膚過敏試驗(yàn),目的: 觀察免疫系統(tǒng)反應(yīng)在皮膚上的表現(xiàn)動物：豚鼠♀♂各半(250-300g)。給藥前24h背部兩側(cè)脫毛，脫毛區(qū)每側(cè)約3 x 3 cm2受試物：若受試物是膏劑或液體，直接試驗(yàn)。若為固體粉末，則用水或賦形劑（如羊毛脂、凡士林、橄欖油等）混勻陽性致敏物：2,4-二硝基氯代苯配成1%的致敏濃度和0.

63、1%的激發(fā)濃度方法：分受試物組，空白對照組，陽性對照組，每組10只（♀♂各半）1. 致敏接觸：將受試物0.1-0.2ml(ｇ)涂在左側(cè)脫毛區(qū)，持續(xù)6h。第７天和第14天，同法各重復(fù)一次2. 激發(fā)接觸：末次致敏后14天，將受試物0.1-0.2ml (ｇ)涂于右側(cè)脫毛區(qū)，陽性對照用0.1%2,4—二硝基氯代苯，６h后去除，即刻觀察，然后于24、48、72h再次觀察過敏反應(yīng)情況結(jié)果評價(jià)：結(jié)果按皮膚反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)評分，根據(jù)試驗(yàn)組與對照組豚

64、鼠皮膚反應(yīng)的差別，判斷受試物對皮膚過敏反應(yīng)性質(zhì) 可用致敏率(紅斑或水腫的動物例數(shù)/受試動物總數(shù))判斷致敏強(qiáng)度,皮膚過敏反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn),皮膚反應(yīng) 分值 紅斑形成： 無紅斑 ０

65、 輕度紅斑 １ 中度紅斑 ２ 重度紅斑 ３ 水腫性紅斑 ４

66、 水腫形成： 無水腫 ０ 輕度水腫 １ 中度水腫 ２

67、 重度水腫 ３,致敏率分類,━━━━━━━━━━━━━━━━━ 致敏率（%） 反應(yīng)強(qiáng)度━━━━━━━━━━━━━━━━━ ０－10 弱致敏性性 20－30 輕度致敏性 40－60

68、 中度致敏性 70－80 高度致敏性 90－100 極度致敏性━━━━━━━━━━━━━━,8、光敏試驗(yàn),有些受試物皮膚涂抹后遇光照可引起光敏反應(yīng)若其化學(xué)結(jié)構(gòu)或某些組成（包括藥物和賦形劑）文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)有光敏作用者應(yīng)作光敏試驗(yàn)其化學(xué)結(jié)構(gòu)和已知光敏劑相似者也應(yīng)做光敏試驗(yàn),皮膚給藥毒性試驗(yàn)