基于萊菔素的現(xiàn)代五類中藥的制備及其藥理毒理初步研究.pdf

1、蘿卜是一種常見的十字花科植物，蘿卜根莖和芽苗是人們?nèi)粘４罅渴秤玫氖卟耍}卜籽可入藥，中藥名稱為萊菔子。作為一種十字花科植物，蘿卜中含有大量的黑芥子酶及蘿卜硫苷，蘿卜組織破損后，黑芥子酶與蘿卜硫苷充分接觸，酶解蘿卜硫苷轉(zhuǎn)化生成萊菔素。作為一種異硫氰酸酯，萊菔素可高效誘導(dǎo)Ⅱ相解毒酶，提高人體對致癌物的清除能力，并能夠有效抑制癌細(xì)胞的生長增殖和殺死癌細(xì)胞。本文主要研究萊菔素粗提物的分離制各工藝，萊菔素粗提物的急性毒性，以及萊菔素粗提物的體內(nèi)外

2、抗癌活性。
　　采用富含蘿卜硫苷和黑芥子酶的蘿卜籽作為原料，建立了高效的萊菔素粗提物分離制備工藝。研究表明，熱壓榨預(yù)處理可消除水解反應(yīng)體系中的硫化氫，有效避免新生成的萊菔素發(fā)生快速降解，從而實(shí)現(xiàn)水解反應(yīng)體系中萊菔素的有效積累。維生素C可有效還原黑芥子酶分子中的巰基，從而高效的激活黑芥子酶，提高萊菔素的生成速率。萊菔素的生成速率隨溫度的降低而顯著升高，低溫有利于萊菔素的酶解生成。黑芥子酶催化蘿卜硫苷水解反應(yīng)的最適pH值是5.0，且有

3、利于酶解反應(yīng)體系中萊菔素的高效積累。SP-850樹脂可快速吸附富集酶解液中的萊菔素，80％乙醇溶液可有效洗脫SP-850樹脂中吸附的萊菔素，再通過二氯甲烷萃取萊菔素濃縮液，可獲得高含量的萊菔素粗提物。最優(yōu)分離條件下，萊菔素粗提物產(chǎn)量為9.25 g·kg-1，產(chǎn)品中萊菔素含量為81.5％，分離制備工藝總體收率為88.3％。
　　體外抗癌活性研究表明，萊菔素粗提物可劑量依賴性地抑制NCI-H460、A549、SK-OV-3、Hela、

4、HepG2、MDA453、MCF-7、 A375、BxPC-3和LNCaP癌細(xì)胞的體外生長增殖，半數(shù)抑制濃度依次為3.22μg·mL-1、7.38μg·mL-1、7.16μg·mL-1、3.92μg·mL-1、4.92μg·mL-1、6.33μg·mL-1、5.84μg·mL-1、0.964μg·mL-1、3.65μg·mL-1和6.71μg·mL-1。A375癌細(xì)胞對萊菔素粗提物最敏感，其半數(shù)抑制濃度比其它癌細(xì)胞普遍低3～8倍。急性毒

5、性實(shí)驗(yàn)表明，萊菔素粗提物對實(shí)驗(yàn)小鼠的半數(shù)致死量為186.8 mg·kg-1，證實(shí)萊菔素粗提物對實(shí)驗(yàn)小鼠具有中等毒性。實(shí)驗(yàn)小鼠死亡的主要原因可能是萊菔素粗提物對實(shí)驗(yàn)小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的強(qiáng)興奮作用，且萊菔素粗提物對實(shí)驗(yàn)小鼠的胃腸道組織具有一定的致?lián)p傷作用。研究評價了萊菔素粗提物的體內(nèi)抗癌活性。實(shí)驗(yàn)研究表明，在50 mg· kg-1到250 mg·kg-1 BID劑量下，萊菔素粗提物對A375癌細(xì)胞移植瘤生長無明顯抑制作用。實(shí)驗(yàn)小鼠體內(nèi)可能具有