人腎癌相關(guān)抗原G250的克隆、表達(dá)、單抗制備和放射免疫顯像的初步研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文人腎癌相關(guān)抗原G250的克隆、表達(dá)、單抗制備和放射免疫顯像的初步研究姓名：姜耀東申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：泌尿外科指導(dǎo)教師：鄭少斌20070410中文摘要a)，但是其療效十分有限，總緩解率僅為100／o20％。不良反應(yīng)大以及缺乏靶向性是其缺點(diǎn)。為了提高腎癌治療的效果，尋找特異性的腫瘤相關(guān)抗原并以此為靶點(diǎn)進(jìn)行診斷、治療是腎癌研究的一大課題。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，G250撇N，CAIX(以下簡(jiǎn)稱G250)顯示了良好的腫瘤特異

2、性，被認(rèn)為是較為理想的腫瘤相關(guān)抗原(tumorassociatedantigen，TAA)，在腎癌的診斷、預(yù)后判斷和生物治療等方面有較好的應(yīng)用前景。人(3250是分布于細(xì)胞膜和細(xì)胞核膜表面的跨膜糖蛋白，是碳酸酐酶的異構(gòu)酶，命名為碳酸酐酶Ⅸ。研究表明98％的腎癌原發(fā)灶有G250抗原表達(dá)，尤其是透明細(xì)胞癌全部有表達(dá)，88％的轉(zhuǎn)移灶有該抗原表達(dá)，而在正常組織中僅限于胃黏膜和大膽管上皮細(xì)胞有少量表達(dá)。因此G250具有良好的腫瘤特異性，是較理想的

3、腫瘤標(biāo)記物和腎癌治療靶點(diǎn)。隨著對(duì)G250研究不斷深入，利用G250在腎癌細(xì)胞膜上的特異性表達(dá)，直接或間接地產(chǎn)生了許多腎癌診斷、治療的新思路和方法。比如G250單克隆抗體(G250McAb)可以直接攻擊表達(dá)(3250的腎癌細(xì)胞，腎癌細(xì)胞表面的(3250抗原可以增強(qiáng)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒反應(yīng)(ADCC)，利用核素標(biāo)記的G250McAb進(jìn)行腫瘤放射免疫顯像、放射免疫治療以及利用G250在腎癌細(xì)胞上表達(dá)的特異性和免疫原性進(jìn)行腫瘤疫苗的研究等

4、。目前國(guó)內(nèi)這方面的研究較少，尚未成功進(jìn)行該抗原的表達(dá)、純化。國(guó)外的G250單克隆抗體尚未商品化，制約了相關(guān)研究的開(kāi)展。本研究的目的是：利用基因工程技術(shù)表達(dá)、純化G250抗原，以其為免疫原，采用雜交瘤技術(shù)，制備鼠源性抗G250的單克隆抗體，以放射性核素標(biāo)記制備的單抗，在荷瘤裸鼠體內(nèi)進(jìn)行放射免疫顯像的初步研究。期望為探索腎癌的早期診斷方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究?jī)?nèi)容共分為三部分：第一部分人腎癌相關(guān)抗原G250蛋白的克隆、表達(dá)和純化；第二部分G25