氯酸鉀誘導(dǎo)龍眼反季節(jié)成花過程生理生化變化與基因差異表達(dá)研究.pdf

1、本研究以‘石硤’龍眼(Dimocarpus longan Lour．cv.'Shixia’)為試材，研究氯酸鉀誘導(dǎo)成花過程中，龍眼樹體內(nèi)源激素、激素間比例關(guān)系、蛋白質(zhì)含量與核酸含量的變化，以及基因差異表達(dá)，探索氯酸鉀誘導(dǎo)龍眼成花的生理生化機(jī)理。主要研究結(jié)果如下： 1、氯酸鉀誘導(dǎo)龍眼反季節(jié)成花效果較好，成花株率為100％，成花枝率為43.5％。 2、氯酸鉀誘導(dǎo)提高了葉片中IAA含量，降低了芽和莖在生理分化的后期以及形態(tài)分化

2、初期IAA的含量；降低了葉片和芽中生理分化期GA3含量，提高了形態(tài)分化期GA3含量，而枝條中GA3含量基本沒有變化；提高了芽中ABA含量，葉片和枝條在生理分化期ABA含量上升，形態(tài)分化期降低；提高了樹體ZR含量水平。 3、氯酸鉀誘導(dǎo)提高了樹體ZR/IAA、ZR/GA3、ABA/GA3和葉片與芽中ZP/ABA的比值，對(duì)枝條內(nèi)ZR/ABA的比值影響不大；在花芽的生理分化期，枝條內(nèi)ABA/IAA提高，葉片和芽內(nèi)ABA/IAA比值下降；

3、在花芽形態(tài)分化期，葉片和芽ABA/IAA比值提高，枝條內(nèi)ABA/IAA的比值降低；誘導(dǎo)過程IAA/GA3比值變化不大。 4、氯酸鉀誘導(dǎo)明顯提高了葉片中可溶性蛋白質(zhì)、非可溶性蛋白質(zhì)和總蛋白質(zhì)的含量；顯著提高了芽內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)含量，非可溶性蛋白質(zhì)含量明顯降低，總蛋白質(zhì)含量基本不變；枝條內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)與非可溶性蛋白質(zhì)的含量變化與芽相反，表現(xiàn)為總蛋白質(zhì)的基本穩(wěn)定。 5、在KClO3誘導(dǎo)過程中，龍眼成花母枝葉片、芽和枝條中的DNA

4、、RNA和核酸含量均發(fā)生大幅度的提高。不同的組織部位之間，DNA、RNA和核酸的變化也存在一定的差異。葉片、芽和枝條中的DNA含量都是在誘導(dǎo)后40d出現(xiàn)最高峰，而芽中RNA和核酸出現(xiàn)高峰時(shí)間為誘導(dǎo)后50d，比葉片和枝條晚10d左右。 6、獲得了兩種簡便有效的龍眼組織總RNA的提取方法，即改良SDS法結(jié)合異丙醇沉淀法和改良CTAB法結(jié)合異丙醇沉淀法。 7、優(yōu)化了適于龍眼組織DDRT-PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序：總體積為25μ

5、l，引物濃度為1.0μmol.L-1，Mg2+濃度為1.8 mmol.L-1，dNTP濃度為100μmol.L-1，rTaq DNA聚合酶濃度為2.0U，模板cDNA濃度為100 ng，在退火溫度為42℃下進(jìn)行DDRT-PCR擴(kuò)增。取得了良好的效果。反應(yīng)程序：94℃5.0min預(yù)變性；94℃ 1.0min，42℃退火2.0min，72℃ 1.5min，40個(gè)循環(huán)；72℃延伸10.0 min，4℃保存。 8、從78對(duì)引物組合中篩選