龍眼成花轉(zhuǎn)變與成花逆轉(zhuǎn)的差異蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、本研究以龍眼正常成花和成花逆轉(zhuǎn)的花芽為研究對象，運用蛋白質(zhì)組學方法和技術比較龍眼正常成花和成花逆轉(zhuǎn)花芽的蛋白質(zhì)組變化，應用雙向電泳對花芽蛋白進行分離，從2-D凝膠上均檢測到分離的蛋白質(zhì)點約1000個，應用PDQuest軟件對凝膠圖譜進行分析，獲得65個表達量差異在2倍以上的差異蛋白，其中28個蛋白在龍眼成花逆轉(zhuǎn)花芽中上調(diào)表達，37個蛋白下調(diào)表達。MALDI-TOF-TOF/MS串聯(lián)質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫檢索鑒定了其中41個差異表達蛋白，鑒定率

2、為63％。鑒定得到的蛋白中，與龍眼成花逆轉(zhuǎn)關系密切的物質(zhì)和能量代謝相關蛋白，轉(zhuǎn)錄和翻譯相關的蛋白，次生代謝相關蛋白，調(diào)控相關蛋白，抗逆相關蛋白和細胞骨架蛋白的生物學功能都得到了討論。通過對這些差異蛋白在成花過程中的功能分析，表明這些蛋白在龍眼成花逆轉(zhuǎn)過程中的差異表達可能影響了花芽的正常發(fā)育，進而導致了龍眼成花逆轉(zhuǎn)。應用RT-PCR和RACE方法克隆其中4個與龍眼成花逆轉(zhuǎn)關系密切的差異蛋白的基因：獲得了上調(diào)表達的調(diào)控因子14-3-3蛋白(

3、登錄號FJ479618)，細胞骨架α-微管蛋白(登錄號FJ479617)，轉(zhuǎn)醛醇酶(登錄號FJ472991)和下調(diào)表達的花青素合成酶(登錄號FJ479616)的完整開放閱讀框，4個基因的全長cDNA都分別在大腸桿菌中表達，獲得相應外源蛋白，其中14-3-3蛋白和α-微管蛋白經(jīng)過Western blotting驗證確認。半定量RT-PCR結果顯示，ANS和TAL在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上具有同樣表達差異，TUB和14-3-3在轉(zhuǎn)錄水平上無明顯差異