CC亞族趨化因子受體6基因敲除對AppE---小鼠動脈粥樣硬化斑塊形成的影響.pdf

1、目的：心血管疾病已經(jīng)成為威脅人類生命和健康的最常見疾病，也是全球關(guān)注的一大公共衛(wèi)生問題，而動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)則是這類疾病發(fā)生、發(fā)展的一個重要病理學(xué)基礎(chǔ)。研究證明趨化因子及其受體是參與動脈粥樣硬化病程進(jìn)展的關(guān)鍵因素，其在炎癥細(xì)胞活化，進(jìn)而遷入內(nèi)膜和促進(jìn)斑塊形成的過程中扮演著至關(guān)重要的角色。CC亞族趨化因子受體6(CC chemokine receptor6，CCR6)是一種兼具有炎癥和穩(wěn)態(tài)功能的趨化因子受

2、體類型，可以廣泛表達(dá)于單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等多種白細(xì)胞的亞型。其中巨噬細(xì)胞可大量吞噬氧化型低密度脂蛋白，并轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞源性的泡沫細(xì)胞，進(jìn)而促進(jìn)了AS內(nèi)膜斑塊的形成和發(fā)展。并且研究表明，單核-巨噬細(xì)胞表達(dá)的單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1，MCP-1)也參與了炎癥過程和粥樣硬化的進(jìn)展。對于未被激活的單核巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞來說，CCR6的表達(dá)是低水平的，但是在動脈粥樣硬化相關(guān)細(xì)胞因子

3、的刺激下CCR6的表達(dá)水平將迅速升高。因此，我們推測CCR6對于AS斑塊的形成、發(fā)展有重要影響。我們將借助CCR6基因敲除的ApoE-/-小鼠模型，進(jìn)一步探討CCR6對動脈粥樣硬化的影響及其作用機制。
　　方法：⑴體外實驗:培養(yǎng)巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞（小鼠來源），并應(yīng)用構(gòu)建成功的CCR6 siRNA干擾巨噬細(xì)胞的CCR6表達(dá)。然后通過噻唑藍(lán)比色實驗(MTT實驗)及細(xì)胞遷移(Transwell)實驗，進(jìn)一步觀察CCR6對RA

4、W264.7巨噬細(xì)胞增殖能力和遷移能力的影響;Western blotting檢測巨噬細(xì)胞MCP-1表達(dá)。⑵動物實驗:雜交培育的雙敲CCR6-/-ApoE-/-小鼠作為實驗組(n=20只)，普通的單敲ApoE-/-小鼠作為對照組(n=20只)，給予高脂飲食飼養(yǎng)。12周后處死兩組小鼠，然后主動脈根部快速取材固定，并制作冰凍切片，進(jìn)行HE染色觀察粥樣斑塊面積，利用油紅O染色觀察粥樣斑塊內(nèi)脂質(zhì)成分含量，并行免疫組化染色測定斑塊內(nèi)單核-巨噬細(xì)胞

5、標(biāo)志物(MOMA-2)和MCP-1的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：①應(yīng)用構(gòu)建成功的CCR6 siRNA干擾RAW264.7巨噬細(xì)胞的CCR6表達(dá)后，巨噬細(xì)胞的增殖能力及遷移能力明顯減弱(P＜0.05)。②與普通ApoE-/-小鼠（對照組）比較，CCR6-/-ApoE-/-小鼠（實驗組）粥樣斑塊面積顯著減?。?6.1±2.0％vs8.3±1.9％，P＜0.05）;脂質(zhì)含量明顯降低（28.5±3.4％vs14.4±2.1％，P＜0.05）;并