肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞在肝再生中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:肝再生是一個(gè)多細(xì)胞和多因子參與調(diào)控的復(fù)雜過(guò)程，肝再生的機(jī)制尚未完全闡明；已有研究提示枯否細(xì)胞(KC)和肝星形細(xì)胞(HSC)等肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞在肝再生過(guò)程中可能發(fā)揮關(guān)鍵性的調(diào)控作用。在整體動(dòng)物水平，KC對(duì)肝再生的作用存在爭(zhēng)議；HSC在肝再生過(guò)程中作用較復(fù)雜，既能分泌細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)參與再生肝結(jié)構(gòu)的重塑，又能分泌與肝細(xì)胞增殖相關(guān)的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子；TGF-β<,1>作為抑制肝細(xì)胞增殖因子，在肝再生的終止階段發(fā)揮重要作用。本文擬通過(guò)探討K

2、C、HSC及其分泌的多種細(xì)胞因子在肝再生過(guò)程中的作用機(jī)制，闡明“非實(shí)質(zhì)細(xì)胞-細(xì)胞因子-肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞”之間信號(hào)途徑在肝再生調(diào)控中的意義。 材料和方法:觀察應(yīng)用肝再生增強(qiáng)因子(ALR)和氯化釓(GdCl<,3>)滅活KC對(duì)小鼠肝再生速率的影響；用MTT檢測(cè)KC條件培養(yǎng)液(KCCM)，HGF和TGF-β<,1>對(duì)大鼠原代肝細(xì)胞增殖的作用；用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)ALR對(duì)KC和HSC(IG12細(xì)胞)中IL-6和TGF-α表達(dá)的影響以及肝再生大鼠

3、的血清對(duì)IG12細(xì)胞α-SMA，TGF-β<,1>表達(dá)的影響；免疫組化，ELISA，Western blot檢測(cè)再生肝組織中PCNA，TNF-α，TGF-α，TGF-β<,1>，bcl-2，p53的表達(dá)特點(diǎn)；流式細(xì)胞術(shù)、Hoechst染色方法檢測(cè)TGF-β<,1>對(duì)肝部分切除(PH)后肝細(xì)胞凋亡率的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: (1)ALR在整體水平能提高PH后小鼠肝再生率，但體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ALR不能直接促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖。

4、 (2)ALR能提高KC和IG12表達(dá)IL-6和TGF-α。 (3)HGF，KCCM能在細(xì)胞水平促進(jìn)肝細(xì)胞增殖，而TGF-β<,1>則抑制肝細(xì)胞增殖。 (4)當(dāng)動(dòng)物(小鼠)體內(nèi)肝KC滅活伴PH后，肝再生率高于單純切除組，KC滅活后肝組織TNF-α，TGF-α的表達(dá)增加而TGF-β<,1>的表達(dá)下降。 (5)PH后收集的大鼠血清能刺激IG12細(xì)胞提高α-SMA和TGF-β<,1>的表達(dá)。 (6)正常大鼠分

5、離的原代肝細(xì)胞和：PH后7d分離的肝細(xì)胞經(jīng)TGF-β<,1>作用后凋亡率高于未處理組(P<0.05)，而PH后1d，3d，5d的肝細(xì)胞經(jīng)過(guò)TGF-β<,1>作用后凋亡率和未處理組相比無(wú)差別。(7)經(jīng)TGF-β<,1>作用后肝細(xì)胞bcl-2(抗凋亡因子)的表達(dá)明顯下降。 結(jié)論: (1)ALR只有通過(guò)作用于KC和HSC等肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞發(fā)揮促進(jìn)肝再生的作用，而不能直接促進(jìn)肝細(xì)胞增殖。 (2)在肝再生過(guò)程中，KC和HSC等