肝組織中Chymase濃度在肝纖維化中的作用及其機(jī)制探討.pdf

1、第一章：肝組織中chymase濃度在各種慢性肝病肝纖維化中的意義
　　第一節(jié)：肝組織中chymase濃度在慢性病毒性肝炎肝纖維化中的意義
　　目的：通過檢測(cè)慢性肝炎患者肝組織中 chymase濃度，觀察不同纖維化分期，其肝組織中chymase濃度的變化，觀察肝組織中chymase濃度與血清肝纖維化指標(biāo)的相關(guān)性；并且用 chymase單克隆抗體標(biāo)記肥大細(xì)胞，以觀察 chymase標(biāo)記的肥大細(xì)胞在肝組織中分布情況，探討肝組織中c

2、hymase濃度在肝纖維化中的意義。
　　方法：對(duì)45例慢性病毒性肝炎患者行肝組織活檢，肝組織中 chymase濃度用ELISA法檢測(cè)；免疫組化染色觀察chymase標(biāo)記的肥大細(xì)胞分布情況，用RT-PCR法檢測(cè)chymase mRNA表達(dá)；血清肝纖維化指標(biāo)采用競(jìng)爭(zhēng)性放射免疫法檢測(cè)。
　　結(jié)果：①不同的纖維化分期，其肝組織中 chymase濃度分別為 S1：5.44±4.32（ng/mg）；S2：6.01±5.32(ng/mg

3、)；S3:28.43±22.25(ng/mg)；S4:34.21±27.06（ng/mg），各組間比較，S1、S2與S3、S4之間有顯著差異(P<0.01)。纖維化輕的S1+S2的肝組織中chymase濃度為5.74±4.82（ng/mg）,纖維化程度重的S3+S4的chymase濃度為31.31±24.67ng/mg，兩組間有顯著差異，P<0.01。②不同的炎癥分級(jí)，其肝組織中chymase濃度分別為G1:5.84±3.98ng/mg

4、，G2：7.41±4.82ng/mg，G3:29.60±20.33ng/mg，G4：33.77±29.55ng/mg。各組間比較，G1及G2組的肝組織中chymase濃度與G3及G4組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01；炎癥分級(jí)輕的G1+G2組其肝組織中chymase濃度（6.39±4.93ng/mg）與炎癥分級(jí)重的G3+G4（30.58±23.53ng/mg）組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01；③檢測(cè)到肝組織中chymase mRNA表

5、達(dá)。慢性肝炎患者肝組織中chymase濃度與血清肝纖維化指標(biāo)HA、PⅢP、LN、c-Ⅳ呈正相關(guān)性，r值分別為0.612，0.239,0.578,0.517，P<0.01，P<0.05，P<0.01，P<0.01；④免疫組化染色與HE染色對(duì)比結(jié)果，慢性肝炎患者的肝組織，用chymase單克隆抗體標(biāo)記的肥大細(xì)胞呈棕色，主要分布于肝纖維化旺盛的匯管區(qū)，并且在肝小葉內(nèi)纖維化部位的類洞壁上也可見到chymase標(biāo)記陽性的肥大細(xì)胞。而且，肝組織中c

6、hymase濃度高的患者，其肝組織內(nèi)chymase標(biāo)記的肥大細(xì)胞增多。結(jié)論：肝組織中chymase濃度與慢性肝炎肝纖維化關(guān)系密切。
　　第二節(jié)：肝組織中chymase濃度在自身免疫性肝病肝纖維化中的意義
　　目的：探討肝組織中chymase濃度在自身免疫性肝炎（AIH）和原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）肝纖維化中的意義。
　　方法：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)15例AIH、14例PBC患者肝組織中chymase濃

7、度，與11例急性肝炎（AH）患者作對(duì)照；用免疫組織化學(xué)染色法觀察chymase單克隆抗體標(biāo)記的肥大細(xì)胞分布情況；用RT-PCR法檢測(cè)肝組織中chymase mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：AIH及PBC患者肝組織中chymase濃度分別為15.53±4.89ng/mg和12.67±3.69ng/mg，明顯高于急性肝炎患者（2.72±1.02ng/mg），免疫組化染色結(jié)果，chymase標(biāo)記的肥大細(xì)胞主要分布于纖維化旺盛的匯管區(qū)，其分布

8、與纖維化部位相一致，且肝組織中chymase濃度高的患者，其肝組織內(nèi)chymase標(biāo)記的肥大細(xì)胞分布增多。
　　結(jié)論：肝組織中chymase濃度可能與自身免疫性肝病肝纖維化關(guān)系密切。
　　第三節(jié)：肝組織中chymase濃度在酒精肝纖維化中的意義
　　目的：探討肝組織中chymase濃度在酒精性肝纖維化中的意義。
　　方法：采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)28例酒精性肝纖維化患者肝組織中chymase濃度，與

9、11例急性肝炎做對(duì)比；用免疫組織化學(xué)染色法觀察chymase單克隆抗體標(biāo)記的肥大細(xì)胞分布情況。
　　結(jié)果：酒精性肝纖維化患者肝組織中chymase濃度為17.53±4.39ng/mg，明顯高于急性肝炎（2.81±1.03ng/mg），P<0.01;免疫組化染色結(jié)果chymase標(biāo)記的肥大細(xì)胞主要分布于纖維化旺盛的肝細(xì)胞周圍及中心靜脈周圍，其分布與纖維化部位相一致，且肝組織中Chymase濃度高的患者，其肝組織內(nèi)chymase標(biāo)記的

10、肥大細(xì)胞分布增多。
　　結(jié)論：肝組織中chymase濃度可能與酒精性肝纖維化關(guān)系密切。
　　第二章：Chymase抑制劑對(duì)大鼠肝纖維化的干預(yù)作用及對(duì)血管緊張素Ⅱ和I型膠原的影響
　　目的：觀察chymase抑制劑對(duì)二甲基亞硝胺（DMN）致大鼠肝纖維化模型的干預(yù)作用和對(duì)chymase、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）及I型膠原（Col-I）的影響，探討chymase參與肝纖維化的機(jī)制。
　　方法：健康大鼠76只隨機(jī)分為3組

11、，正常對(duì)照組：正常對(duì)照組（生理鹽水），模型組（DMN），干預(yù)組（DMN+chymase抑制劑）。模型組及干預(yù)組給予大鼠1％二甲基亞硝胺（DMN）（1ml/kg）腹腔注射，共42d。干預(yù)組從第1天開始給予chymase抑制劑灌胃（10mg/kg）；模型組與干預(yù)組分別在第10,17,28,42,56天觀察肝臟組織病理，并檢測(cè)肝組織chymase、AngⅡ及Col-I的含量，chymase濃度采用ELISA法檢測(cè)，AngⅡ及Col-I含量采用

12、放射免疫法檢測(cè)。
　　結(jié)果：（1）干預(yù)組肝臟組織病理較模型組明顯減輕，無肝硬化發(fā)生。（2）模型組及干預(yù)組肝組織中chymase濃度及chymase mRNA表達(dá)明顯升高，與對(duì)照組比較差異有顯著性（P<0.01），chymase抑制劑干預(yù)組較模型組明顯減少（P<0.01）。（3）模型組和干預(yù)組肝組織 AngⅡ及 Col-I含量持續(xù)升高，與對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.01），干預(yù)組較模型組表達(dá)明顯減少（P<0.01）。
　　

13、結(jié)論：chymase抑制劑能減輕DMN誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化，可能通過下調(diào)chymase、AngⅡ及Col-I的表達(dá)而起作用。
　　第三章：纈沙坦對(duì)肝硬化患者血清TGF-β1、HA、CG濃度的影響
　　目的：探討纈沙坦對(duì)肝硬化患者血清TGF-β1、HA、CG濃度的影響。
　　方法：將40例肝硬化患者隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組各20例。對(duì)照組常規(guī)治療，治療組在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上加用口服纈沙坦80mg/d，療程3個(gè)月。治療前后采用酶