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1、目的:首先探討NLRP3炎癥復(fù)合體在高糖環(huán)境下培養(yǎng)的大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞(NRK-52E)中的表達(dá)情況,并通過轉(zhuǎn)染針對(duì)NLRP3的特異性真核表達(dá)質(zhì)粒,進(jìn)一步研究NLRP3炎癥復(fù)合體與細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系。
方法:將體外環(huán)境培養(yǎng)的NRK-52E細(xì)胞分為5組:(1)正常對(duì)照組:培養(yǎng)基含5.6mmol/LD-葡萄糖;(2)等高對(duì)照組:培養(yǎng)基含5.6mmol/LD-葡萄糖,24.4mmol/L甘露醇;(3)高糖組:培養(yǎng)基含30mm
2、ol/LD-葡萄糖;(4)高糖+陰性對(duì)照組:細(xì)胞在轉(zhuǎn)染含無關(guān)序列的重組質(zhì)粒后培養(yǎng)于高糖培養(yǎng)基中;(5)高糖+干擾組:細(xì)胞轉(zhuǎn)染針對(duì)NLRP3的SiRNA表達(dá)質(zhì)粒后培養(yǎng)于高糖培養(yǎng)基中。各組分別培養(yǎng)48h后應(yīng)用Westernblotting檢測(cè)NLRP3、ASC及Caspase-1和Caspase-3蛋白質(zhì)的表達(dá)情況,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。
結(jié)果:高糖刺激可上調(diào)NRK-52E細(xì)胞NLRP3炎癥復(fù)合體的表達(dá)(P<0.05)及
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