針刺豐隆穴預(yù)防小鼠高膽固醇血癥的相關(guān)基因研究.pdf

1、針刺在臨床降低高膽固醇血癥中已具有較肯定的療效，而我們已有的實(shí)驗(yàn)也證明了針刺豐隆穴可以預(yù)防小鼠的高膽固醇血癥。在本實(shí)驗(yàn)室的前期工作中，共獲得6組不同處理的小鼠肝臟樣品，分別是正常組(NM)、高脂組(HC)、針刺治療組(EA)、他汀組(ST)、針刺預(yù)防組(EP)、針刺非穴位組(EN)。對(duì)各組小鼠血液多項(xiàng)生化指標(biāo)的分析結(jié)果表明，針刺豐隆穴可以有效預(yù)防高膽固醇小鼠血漿總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇水平的升高。本文以高膽固醇血

2、癥組與針刺預(yù)防組小鼠為模型，對(duì)其肝臟組織的基因表達(dá)進(jìn)行比較研究，為理解針刺預(yù)防高膽固醇血癥的機(jī)制從分子水平上提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)。 在本實(shí)驗(yàn)中，我們選取高脂組、針刺預(yù)防組2組小鼠肝臟組織，應(yīng)用SMART技術(shù)逆轉(zhuǎn)錄并擴(kuò)增以獲取2組小鼠肝臟細(xì)胞的全長(zhǎng)總cDNA,運(yùn)用抑制消減雜交(Suppression Subtractive Hybridization，SSH)技術(shù)獲得正反2個(gè)方向的差異表達(dá)基因譜。為了消除SSH過程中所產(chǎn)生的假陽性克隆，

3、首先采用一種新的消除背景的方法(Negatire Subtraction Chain，NSC)方法去除了SSH PCR所產(chǎn)生的部分假陽性產(chǎn)物。在SSH-NSC富集差異基因的基礎(chǔ)上，我們采用了斑點(diǎn)雜交的方法對(duì)2個(gè)文庫(kù)進(jìn)行了差異基因的進(jìn)一步篩選，共獲得22個(gè)差異片段，克隆并測(cè)序。經(jīng)過序列測(cè)定和分析，共得到11個(gè)在針刺預(yù)防組中上調(diào)表達(dá)基因和5個(gè)下調(diào)表達(dá)基因。除了2個(gè)基因功能未知以外，其他可分類的基因分別與膽固醇代謝，脂代謝，糖代謝，免疫調(diào)控等