人纖維環(huán)細胞與骨髓間充質干細胞Transwell共培養(yǎng)研究.pdf

1、背景：椎間盤退變常引起頸肩痛和腰腿痛。常用的手術治療方法雖可提供良好的短期療效，但手術改變了脊柱的生物力學，導致相鄰椎間盤的進一步退變。因此，尋找可在椎間盤退變早期進行干預并維持脊柱生物力學的組織工程修復方法，成為目前研究的焦點。骨髓間充質干細胞(BMSCs)更是成為研究椎間盤退變修復的干細胞治療的熱點。纖維環(huán)(AF)是椎間盤的重要組成結構，其結構和功能的完整性在椎間盤退變防治中有著重要意義。
　　 目的：探討人的纖維環(huán)(AF)

2、細胞與骨髓間充質干細胞(BMSCs)在Transwell共培養(yǎng)后，對AF細胞的細胞增殖和細胞外基質合成的影響，以及BMSCs是否具有向AF細胞分化的能力。
　　 方法：分別對5例年齡在40歲以下脊柱手術病人的纖維環(huán)組織和骨髓標本進行分離、培養(yǎng)AF細胞和BMSCS，分別吸取第三代的AF細胞和BMSCs，按1∶1的細胞比例分別植于Transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)中，下室植入BMSCs，上室植入AF細胞。并且建立3個細胞培養(yǎng)組，即BMSC

3、s與AF細胞共培養(yǎng)組（實驗組），BMSCs單獨培養(yǎng)組和AF細胞單獨培養(yǎng)組作為對照組。培養(yǎng)3周后，運用倒置相差顯微鏡觀察細胞的形態(tài)變化；分別用HE染色、Ⅰ型膠原免疫組化染色和流式細胞儀對兩種細胞鑒定；運用熒光定量PCR法檢測各細胞培養(yǎng)組蛋白聚糖Aggrecan、Ⅰ型膠原蛋白mRNA及Sox9的表達變化。
　　 結果：兩種細胞在分離培養(yǎng)后經(jīng)過鑒定確定為AF細胞和BMSCs。在倒置相差顯微鏡觀察下，共培養(yǎng)組中AF細胞和BMSCs在細胞