家兔間盤細(xì)胞三維培養(yǎng)及臭氧對(duì)單層細(xì)胞的作用觀察.pdf

1、間盤源性疼痛已經(jīng)成為困擾人體健康的常見(jiàn)疾病，隨著認(rèn)識(shí)的進(jìn)一步深入，傳統(tǒng)的手術(shù)治療不再是唯一的選擇，新的治療方法、治療技術(shù)不斷涌現(xiàn)，并日臻成熟和廣泛推廣，應(yīng)用于間盤源性疼痛的治療。臭氧髓核消融術(shù)是最近風(fēng)靡歐洲的一種經(jīng)皮穿刺技術(shù)，具有安全、有效、損傷小、恢復(fù)快的優(yōu)點(diǎn)，深受醫(yī)患雙方的歡迎。并且近年來(lái)隨著組織工程學(xué)的蓬勃發(fā)展和在骨與關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)中的成功應(yīng)用，人們開(kāi)始嘗試用組織工程學(xué)的方法重建受損或切除的間盤。 目的： 1、本

2、實(shí)驗(yàn)主要是在單層培養(yǎng)家兔間盤細(xì)胞的基礎(chǔ)之上建立三維培養(yǎng)模型，作為以后應(yīng)用椎間盤組織工程學(xué)治療間盤源性疼痛的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 2、并且通過(guò)醫(yī)用臭氧(O<,3>)作用于體外培養(yǎng)家兔間盤細(xì)胞，觀察不同濃度臭氧在不同時(shí)間的作用效應(yīng)，從而指導(dǎo)臨床治療工作。 方法： 實(shí)驗(yàn)一：首先建立家兔間盤細(xì)胞體外單層培養(yǎng)系統(tǒng)，將家兔處死后取出間盤組織，采用組織消化分散法收集細(xì)胞后種植在24孔培養(yǎng)板上，在單層培養(yǎng)的家兔間盤細(xì)胞傳代后，將所有收集的

3、細(xì)胞置于一錐形瓶?jī)?nèi)，37℃下，持續(xù)給予160rpm偏心軸旋轉(zhuǎn)，六天后，4℃下4％多聚甲醛固定，瓊脂定形后蠟塊包埋切片HE染色，光鏡下觀察。 實(shí)驗(yàn)二：將單層培養(yǎng)的家兔間盤細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，分成四組，分別給予純氧、30ug/ml醫(yī)用臭氧、60ug/ml醫(yī)用臭氧、80ug/ml醫(yī)用臭氧，分別于15分鐘和130分鐘時(shí)取細(xì)胞作臺(tái)盼藍(lán)細(xì)胞排斥試驗(yàn)。 統(tǒng)計(jì)分析：采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組內(nèi)比較采用兩樣本t檢驗(yàn)，組間單因素

4、方差分析。P<0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)一：三維培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，肉眼下，家兔間盤細(xì)胞呈白色沙粒樣團(tuán)塊，即Pellet小體。間盤細(xì)胞蠟塊包埋HE染色后可見(jiàn)，細(xì)胞聚集呈現(xiàn)為細(xì)胞團(tuán)，并且與單層細(xì)胞培養(yǎng)中表現(xiàn)的成纖維細(xì)胞樣梭形形態(tài)不同，呈近乎自然形態(tài)的類圓形。 實(shí)驗(yàn)二：15分鐘時(shí)不同濃度醫(yī)用臭氧組間都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且隨著臭氧濃度的增加，活細(xì)胞率呈降低趨勢(shì)。30分鐘時(shí)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，對(duì)照組與30ug/ml醫(yī)用

5、臭氧組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，其他各組之間都存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。對(duì)照組、30ug/ml醫(yī)用臭氧組及80ug/ml醫(yī)用臭氧組在不同時(shí)間前后臺(tái)盼藍(lán)細(xì)胞排斥試驗(yàn)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；只有60ug/ml醫(yī)用臭氧組在15分鐘和30分鐘時(shí)臺(tái)盼藍(lán)細(xì)胞排斥試驗(yàn)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 采用傳統(tǒng)的離心管內(nèi)細(xì)胞團(tuán)聚集培養(yǎng)方法得到的細(xì)胞小球HE染色后發(fā)現(xiàn)，表層細(xì)胞呈現(xiàn)梭形，內(nèi)部細(xì)胞比較分散，呈類圓形或者多角形；而本實(shí)驗(yàn)方法發(fā)現(xiàn)在Pellet小體中細(xì)胞多數(shù)成