GM6001對(duì)人宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)人臍靜脈內(nèi)皮單層細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：建立宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)人臍靜脈內(nèi)皮單層細(xì)胞的模型（以下簡(jiǎn)稱(chēng)宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)模型），探討MMP-9在宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體中的表達(dá)與宮頸癌浸潤(rùn)的關(guān)系，并研究基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑GM6001對(duì)宮頸癌HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的影響。 方法： （一）、建立宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體的浸潤(rùn)模型 1、運(yùn)用液體重旋培養(yǎng)法培養(yǎng)宮頸鱗癌細(xì)胞株HCE1多細(xì)胞球體； 2、培養(yǎng)人

2、臍靜脈內(nèi)皮單層細(xì)胞； 3、宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞共同培養(yǎng)：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞70000/孔接種于48孔板，培養(yǎng)48個(gè)小時(shí)。HCE1多細(xì)胞球體重懸于完全培基，調(diào)整濃度為5-10個(gè)/ml，每個(gè)孔板里加1ml。置37℃，5％CO2及飽和濕度的培養(yǎng)箱共同培養(yǎng)7天。 （二）、免疫組化法檢測(cè)宮頸鱗癌HCE1單層細(xì)胞、宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體及人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中MMP-9的表達(dá) （三）、MMPs抑制劑GM

3、6001干預(yù)宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)模型 1、實(shí)驗(yàn)分組：①對(duì)照組：同等濃度DMSO②GM60012.5uM組③GM600112.5uM組； 2、MMPs抑制劑GM6001對(duì)宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)模型的影響：宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞共同培養(yǎng)1h，加入干預(yù)藥物，并從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始的第1天，每天更換培基1ml及同等濃度的干預(yù)藥物。光學(xué)顯微鏡下觀察第0、1、4、7天宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)模型的

4、浸潤(rùn)情況，用Motic Med6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)軟件測(cè)量宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)范圍，分析GM6001的抑制作用； 3、免疫組化檢測(cè)宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)模型第4天各組MMP-9的表達(dá)。 結(jié)果： （一）、成功建立宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體的浸潤(rùn)模型 1、宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體的培養(yǎng)：宮頸鱗癌HCE1細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，液體重旋法培養(yǎng)24小時(shí)可見(jiàn)細(xì)胞聚集成較小的松散聚集體，隨培養(yǎng)時(shí)間

5、的延長(zhǎng)結(jié)構(gòu)更加緊密，直徑逐漸增大。 2、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)：生長(zhǎng)狀態(tài)良好，呈多邊形，相互緊貼，呈鋪路石狀。 3、宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)模型的建立：在共同培養(yǎng)1小時(shí)后，宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體緊密粘附于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體明顯解聚，迅速擴(kuò)散浸潤(rùn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞退縮明顯。 （二）、免疫組化法檢測(cè)MMP-9的表達(dá)：宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體中MMP-9

6、高表達(dá)率明顯高于宮頸鱗癌HCE1單層細(xì)胞（p<0.05）。人臍靜脈內(nèi)皮單層細(xì)胞MMP-9呈陰性表達(dá)。 （三）、MMPs抑制劑GM6001干預(yù)宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)模型： 1、GM60012.5uM組：與對(duì)照組比較，宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體解聚能力減弱，浸潤(rùn)范圍縮小，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞退縮程度降低，至浸潤(rùn)第7天，宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體的浸潤(rùn)能力抑制率達(dá)26.09％，與對(duì)照組相比差異有顯著性（p<0.05）。

7、 2、GM600112.5uM組：與對(duì)照組比較，宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體未見(jiàn)明顯解聚，浸潤(rùn)范圍明顯縮小，人臍靜脈內(nèi)皮單層退縮不明顯，至浸潤(rùn)第7天，宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體的浸潤(rùn)能力抑制率達(dá)92.95％，與對(duì)照組相比差異有顯著性（p<0.05）。 3、宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)模型第4天對(duì)照組和試驗(yàn)組中MMP-9的表達(dá)：GM60012.5uM組MMP-9高表達(dá)率較對(duì)照組降低（Pearson X2=2.133，P>0.0