三維培養(yǎng)腫瘤細胞耐藥性及放射敏感性的研究.pdf

1、目的：
　　建立三維細胞模型，觀察其細胞形態(tài)學變化，研究三維培養(yǎng)對腫瘤細胞耐藥性及放射敏感性的影響，并比較與單層培養(yǎng)的差異，進一步探討其應(yīng)用前景。
　　方法：
　　1、建立體外人U87腦膠質(zhì)瘤細胞、人HDF成纖維細胞、共培養(yǎng)相同濃度兩種細胞的3D和2D培養(yǎng)模型，熒光相差顯微鏡觀察并記錄其形態(tài)學變化。
　　2、分別給予不同劑量照射和不同濃度藥物處理3D及2D細胞，熒光相差顯微鏡觀察3D及2D形態(tài)學變化以及遷移增殖能

2、力，MTT法測定各組細胞存活率。
　　結(jié)果：
　　1、2D培養(yǎng)人HDF成纖維細胞和共培養(yǎng)細胞呈單層平面分布，人U87腦膠質(zhì)瘤細胞可在平面聚集成點，3D培養(yǎng)顯示人U87腦膠質(zhì)瘤細胞形成團狀聚集，3D共培養(yǎng)細胞顯示聚集形態(tài)比較貼近單純培養(yǎng)人HDF成纖維細胞走向。
　　2、2D培養(yǎng)細胞隨著藥物濃度增加，形態(tài)明顯改變及部分細胞脫離培養(yǎng)皿，3D細胞培養(yǎng)相同濃度藥物則無明顯變化甚至人U87腦膠質(zhì)瘤細胞繼續(xù)培養(yǎng)依舊能形成3D結(jié)構(gòu)，M

3、TT顯示在10μmol/L各組細胞2D及3D培養(yǎng)存活率差異不明顯，隨著濃度增加各組細胞3D較2D培養(yǎng)存活率明顯升高。
　　3、培養(yǎng)六天觀察：2D培養(yǎng)U87、HDF、Co-culture三組細胞予2Gy輻照組細胞形態(tài)基本正常；8Gy組人U87腦膠質(zhì)瘤細胞形態(tài)萎縮且多數(shù)細胞死亡；12Gy組細胞多呈碎片。3D培養(yǎng)結(jié)果顯示2Gy、4Gy、8Gy及12Gy組和對照組形態(tài)無明顯區(qū)別，但12Gy組增殖能力下降。MTT結(jié)果顯示除人HDF成纖維細胞

4、2Gy組3D和2D培養(yǎng)無統(tǒng)計學差異（P=0.05），其它組3D細胞存活率明顯高于單層培養(yǎng)細胞（P<0.05）。進一步延長時間培養(yǎng)結(jié)果顯示3D培養(yǎng)人U87腦膠質(zhì)瘤細胞在對照組、2Gy、4Gy、8Gy組均能形成三維結(jié)構(gòu)，隨著劑量增加遷移至末端的時間相應(yīng)變長，12Gy組少部分細胞可遷移至1/2處，無3D結(jié)構(gòu)形成。而2D細胞隨著時間延長結(jié)果無明顯變化4Gy組增殖能力明顯降低，12Gy幾乎大部分死亡。
　　結(jié)論：
　　3D培養(yǎng)相對于2

5、D培養(yǎng)的細胞具有耐藥性及輻射不敏感性，腫瘤細胞差異更為明顯，更能模擬腫瘤細胞及與間質(zhì)之間的作用過程和作用機制，接近體內(nèi)細胞生長的微環(huán)境，直觀的展現(xiàn)腫瘤細胞黏附、侵襲和遠處轉(zhuǎn)移的生物學過程。表明3D培養(yǎng)的三維腫瘤細胞結(jié)構(gòu)更接近人體器官結(jié)構(gòu)，培養(yǎng)細胞具有更好的增殖轉(zhuǎn)移能力，更接近于人體實體腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的可能機制，對放射增敏劑、化療藥物效果研究、對測定研究腫瘤抗輻射、耐藥基因表達改變及信號通路激活改變細胞間質(zhì)及細胞表型提供更貼近實體腫瘤的實