腫瘤微環(huán)境對腫瘤預后及化療耐藥性的影響研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 食管鱗癌間質Caveolin-1蛋白表達的預后價值研究
　　目的：
　　在全球范圍內，食管癌的病死率高居第六位，是人類最常見的惡性實體腫瘤之一。盡管采用了包括手術、放療和化療在內的綜合治療，食管癌病人的五年生存率僅有20％左右。食管癌分為兩大主要病理類型，分別是食管腺癌和食管鱗癌。我國屬于食管癌高風險區(qū)域，且90％以上食管癌患者的病理類型為食管鱗癌。因此，對食管鱗癌發(fā)病和

2、預后的相關研究意義重大。
　　惡性實體腫瘤有以下兩個主要構成部分:腫瘤實質和腫瘤間質。腫瘤間質（即腫瘤微環(huán)境）主要包括癌相關成纖維細胞(Cancer Associated Fibroblasts，CAFs)，細胞外基質(Extracellular Matrix，ECM)，腫瘤相關巨噬細胞等。其中，腫瘤間質細胞，如CAFs等，能夠與腫瘤實質細胞產生相互作用而促進腫瘤的生長、侵襲和轉移，因而在近年來受到越來越多的關注。而Caveoli

3、n-1（小凹蛋白-1，Cav-1）蛋白被多項研究證明是介導腫瘤間質細胞和腫瘤實質細胞相互作用的關鍵因素之一。
　　Cav-1是組成Caveolae的一種跨膜整合蛋白，可與包括酪氨酸激酶受體，G蛋白偶聯(lián)受體等在內的信號分子結合并調節(jié)其活性，從而參與信號轉導的調節(jié)。多項研究表明，Cav-1在腫瘤生長、侵襲和轉移等方面是不可或缺的調節(jié)因子之一。而近期報道進一步表明，在腫瘤間質細胞與實質細胞的相互作用中，Cav-1具有重要的調節(jié)功能;且間

4、質Cav-1蛋白表達缺失在多種腫瘤中與臨床預后有明顯的相關性。然而，食管鱗癌中Cav-1表達水平迄今為止極少有人研究，且其臨床、病理意義也并不明確。
　　所以，我們的研究目的是經免疫組化染色方法評估食管鱗癌實質和間質中的Cav-1蛋白表達水平，并分析其與患者臨床病理因子及預后的關系。
　　方法：
　　1.研究對象及隨訪
　　研究的對象選取從2006年12月至2007年12月至我院胸外科行根治性切除術，并且術后證實

5、為食管鱗癌的病人。排除其中術前曾行放療/化療，或術后30天內死亡的患者，最終入組患者110例，包括89例男性患者，21例女性患者。通過醫(yī)院電子病案系統(tǒng)獲取所有入組病人的臨床資料，進行回顧性分析，并根據(jù)American Joint Committee on Cancer Staging Manual(7th ed,2010)明確其TNM分期。
　　隨訪工作自手術結束當天開始，持續(xù)至2013年1月或者病人死亡為止。中位隨訪時間49.2

6、個月（范圍，3.5-72.9個月）。每位病人手術結束后兩年之內每隔三個月進行一次常規(guī)體格檢查和病史回顧，2年后檢查周期改為每隔6個月一次。癌相關血液指標復查視情況而定，每三或五個月一次;如有必要時可行影像學檢查。
　　所有參與實驗的病人均已獲知實驗內容，并且簽署了知情同意書;本實驗的所有步驟均經過仔細審查，并且獲得了山東大學齊魯醫(yī)院倫理委員會批準。
　　2.病理標本處理及免疫組化染色
　　所有入組病人腫瘤標本由本院病理

7、科獲取，固定、石蠟包埋后制作厚度5μm左右的病理切片。所有病人的切片用Cav-1抗體作免疫組織化學染色并在染色過程中設置相應的陽性和陰性對照。
　　3.染色結果分析
　　首先在顯微鏡低倍鏡（放大倍數(shù)100倍）下經過初步評估篩查出10個著色較明顯的視野，然后在高倍鏡（10*40）下，分別對Caveolin-1蛋白表達陽性的腫瘤細胞(tumor cells，T)和腫瘤間質細胞(stromal cells，S)進行計數(shù)。然后根據(jù)計

8、數(shù)行Caveolin-1蛋白表達級別判定并加以統(tǒng)計。統(tǒng)計結果由兩位互相獨立的病理學人員分別加以分析。
　　結果：
　　Cav-1在腫瘤實質和間質細胞的胞漿及胞膜上均有一定量的表達。腫瘤實質Cav-過表達率37.3％，與腫瘤浸潤深度相關(p=0.038)。腫瘤間質Cav-1低表達率40.9％。間質Cav-1低表達組的淋巴結轉移及局部復發(fā)發(fā)生率均明顯高于間質Cav-1高表達組(p值分別為0.020和0.002)。除此以外，腫瘤間

9、質Cav-1低表達組病人的無病生存率(DFS，p＜0.001)和總生存率(OS，p＜0.001)均明顯低于間質Cav-1高表達組。多因素分析表明，腫瘤間質Cav-1表達下調是食管鱗癌病人無病生存率(DFS)和總生存率(OS)的獨立預測因子(p值分別為0.028和0.007)。
　　結論：
　　對食管鱗癌而言，間質Cav-1表達下調者其惡性程度更高。間質Cav-1表達下調預示著淋巴結轉移及局部復發(fā)風險更高，病人不良預后可能性更

10、大。
　　第二部分 食管鱗癌M2/M1比例的預后價值研究
　　目的：
　　近期多個報道提示，在多種惡性實體腫瘤的微環(huán)境中，M2樣巨噬細胞數(shù)目與M1樣巨噬細胞數(shù)目的比例與病人的預后有明顯的相關性。但在食管鱗癌中，以上兩種細胞對于病人生存情況的影響尚沒有人探索。我們實驗通過長期隨訪食管鱗癌病人并標記不同極性的巨噬細胞，來評估M2/M1比的臨床病理意義，以達到檢測這一比例對病人預后預測價值的目的。
　　方法：
　

11、　收集110例食管鱗癌病人的病理切片作免疫組化，以CD40作為M1樣巨噬細胞的標記物，以CD163作為M2樣巨噬細胞的標記物。在顯微鏡下分別計數(shù)M1樣巨噬細胞數(shù)目和M2樣巨噬細胞的數(shù)目，然后計算出每個病例的M2/M1比例。通過隨訪獲得所有病人對應的預后情況，最后分析M2/M1比與病人臨床病理因子之間的關系和對預后的預測價值。
　　結果：
　　在M1樣巨噬細胞計數(shù)和M2樣巨噬細胞計數(shù)與食管鱗癌預后之間不存在顯著的相關性。高M2

12、/M1比的病人發(fā)生淋巴轉移的風險和局部復發(fā)風險顯著升高。高M2/M1比組患者和低M2/M1比組患者的中位生存期(MST)分別為25.4個月（范圍3.5各個月-102.3個月）和62.8個月（范圍7.5個月-103.9個月）。Kaplan-Meier分析表明高M2/M1比與更低的5年總生存率(p＜0.001)和更低的5年無病生存率(p＜0.001)。最后，此實驗的多因子分析結果顯示，M2/M1比是5年總生存率(p=0.016)和5年無病生