基于細胞阻抗傳感技術(shù)的腫瘤耐藥性評估研究.pdf

1、肺癌是臨床最常見的惡性腫瘤，化學(xué)治療作為全身性治療的手段，在惡性腫瘤的治療中具有手術(shù)和放療治療不可替代的地位，細胞的體外篩選方法是臨床前篩選抗腫瘤藥物的有效方法，而最常用的MTT法為終點測試，不能連續(xù)、實時監(jiān)測，存在一定局限性。細胞電阻抗傳感技術(shù)可在近似生理環(huán)境下通過測量細胞和微電極之間電阻抗的改變來動態(tài)地記錄細胞增殖、細胞毒性和細胞形態(tài)的變化，具有無需標記，非侵害性、實時動態(tài)監(jiān)測、高靈敏度、高通量的優(yōu)點。本研究擬建立一種利用細胞電阻抗

2、傳感技術(shù)進行體外藥物篩選與評價的新方法，并應(yīng)用于薊賓磷脂增溶微粒逆轉(zhuǎn)A549/PTX細胞株耐藥性的評價。
　　本研究以肺腺癌細胞系A(chǔ)549和大細胞肺癌細胞系NCI-H460為實驗用腫瘤細胞，首先通過考察不同的細胞接種量與吸光度的線性關(guān)系，驗證MTT法測定準確性，然后利用MTT法測定A549和NCI-H460兩株細胞對紫杉醇注射液、多西他賽注射液、長春瑞濱注射液及注射用培美曲塞二鈉及順鉑注射液的敏感性。兩株細胞對紫杉醇注射液及多西他

3、賽注射液均敏感，且隨著藥物濃度的增加，細胞抑制率有所增加；A549細胞株對長春瑞濱注射液及注射用培美曲塞二鈉的敏感性較差，而NCI-H460細胞株對兩種藥物呈中度敏感，但隨著藥物濃度的增加，兩株細胞的抑制率均無明顯變化；在順鉑注射液的作用下，A549細胞株的抑制率隨著藥物濃度增加而增加，NCI-H460細胞株的抑制率隨著藥物濃度增加無明顯變化。
　　通過細胞電阻抗傳感技術(shù)動態(tài)監(jiān)測方法和MTT方法分別測定紫杉醇注射液、多西他賽注射液

4、、長春瑞濱注射液和注射用培美曲塞二鈉4種抗腫瘤藥對人大細胞肺癌細胞株NCI-H460生長的影響，借助配對t檢驗、組內(nèi)相關(guān)系數(shù)以及Bland-Altman法等數(shù)據(jù)分析方法對兩種方法所測得抑制率進行一致性綜合評價，結(jié)合電子顯微鏡下細胞的形態(tài)學(xué)觀察，佐以人肺癌腺細胞株A549的驗證實驗，評估所建立的新方法。結(jié)果顯示ECIS法可定性定量地表征不同藥物對NCI-H460細胞和A549細胞作用的過程動態(tài)信息，反映不同藥物作用特征性差異，以細胞指數(shù)作

5、用時間關(guān)系表征的細胞動態(tài)生物反應(yīng)譜可靈敏地反映藥物抑制NCI-H460細胞的動態(tài)特征效應(yīng)信息，同時抑制率數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示兩種方法一致性較好，電子顯微鏡下不同時期NCI-H460細胞形態(tài)及A549細胞株的驗證實驗進一步說明該方法的可行性，提示所建立的基于細胞電阻抗分析方法可用于體外藥物篩選與評價。
　　將水飛薊素、卵磷脂及其他輔料制成薊賓磷脂增溶微粒，首先對其進行外觀及溶解度等質(zhì)量評價，然后利用實時細胞電阻抗法檢測其細胞毒性，篩選對

6、A549/PTX細胞株抑制率小于20％的劑量，將該劑量用于逆轉(zhuǎn)A549/PTX細胞株的耐藥性研究，利用實時細胞電阻抗法檢測A549及A549/PTX兩株細胞在紫杉醇作用下的生物反應(yīng)譜及抑制率，A549/PTX細胞株對紫杉醇的敏感性顯著低于 A549株，呈現(xiàn)出較強的耐藥性，在一定濃度紫杉醇的作用下，兩株細胞的生物反應(yīng)譜均呈類似的峰谷趨勢。當(dāng)在耐藥細胞株中加入薊賓磷脂增溶微粒后，生物反應(yīng)譜也呈峰谷趨勢，但達峰值時間前移了約5h，抑制率也所有