2012～2013年IBV廣西分離株的基因序列分析和血清學鑒定.pdf

1、分類號UDC$85831碩士學位論文密級2012～2013年IBV廣西分離株的基因序列分析和血清學鑒定國家自然科學基金項目(31360611)廣西自然科學基金項目(2014GXNSFDAl18011)資助廣西自然科學基金項目(2013GXNSFCA019010)吳翠蘭論文答辯El期2Q!生旦25目學位授予El期2012～2013年IBV廣西分離株的基因序列分析和血清學鑒定摘要雞傳染性支氣管炎病毒(Infectiousbronchitis

2、virus，IBV)侵害雞群，給養(yǎng)禽業(yè)造成了重大的經濟損失。不同國家、地區(qū)流行的IBV存在差異，因此及時掌握本地區(qū)現場流行毒株基因的變異乃至抗原性的變化，對該病的防控和疫苗的研發(fā)都非常重要。為進一步了解近年廣西IBV流行株的遺傳變異情況和為新疫苗的研發(fā)提供依據，本課題對2012～2013年的廣西IBV分離株進行了如下基因序列分析和血清學鑒定。首先，通過RTPCR的方法對2012～2013年從廣西從免疫失敗的雞群中分離鑒定的15株IBV分

3、離株基因組3’端的SN基因區(qū)段(包含S1、S2、3a、3b、E、M、5a、5b和N基因)進行擴增、測序，應用生物學軟件進行相似性分析、進化樹分析和重組分析，用在線軟件進行O糖基化位點和正向選擇位點分析。序列測定結果顯示各分離株的S_N基因區(qū)段片段長度為6767bp～6939bp。與常用的疫苗株H120以及國內外參考株比較，大部分毒株的S1基因廣泛存在氨基酸的缺失、替代以及插入現象，其它各基因片段只存在氨基酸的替代。氨基酸進化樹表明，各基

4、因在進化樹上不完全平行。重組分析結果顯示GXNNl30048的S1基因具有重組現象，來源于LX4型野毒株與疫苗株4／91的重組。O糖基化位點結果顯示15株IBV分離株的N蛋白都有糖基化位點且位點數量最多為21～28個。正向壓力檢測結果表明，S1蛋白的aa308位置存在正向選擇位點。以上結果表明15株IBV分離株九個基因已不同程度的發(fā)生變異。其次，測定20122013年15株IBV分離株的TOCID50，利用本課題組己鑒定出7種不同血清型