2012～2013年IBV廣西分離株的基因序列分析和血清學(xué)鑒定.pdf

1、分類號(hào)UDC$85831碩士學(xué)位論文密級(jí)2012～2013年IBV廣西分離株的基因序列分析和血清學(xué)鑒定國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31360611)廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2014GXNSFDAl18011)資助廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2013GXNSFCA019010)吳翠蘭論文答辯El期2Q!生旦25目學(xué)位授予El期2012～2013年IBV廣西分離株的基因序列分析和血清學(xué)鑒定摘要雞傳染性支氣管炎病毒(Infectiousbronchitis

2、virus，IBV)侵害雞群，給養(yǎng)禽業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。不同國家、地區(qū)流行的IBV存在差異，因此及時(shí)掌握本地區(qū)現(xiàn)場流行毒株基因的變異乃至抗原性的變化，對(duì)該病的防控和疫苗的研發(fā)都非常重要。為進(jìn)一步了解近年廣西IBV流行株的遺傳變異情況和為新疫苗的研發(fā)提供依據(jù)，本課題對(duì)2012～2013年的廣西IBV分離株進(jìn)行了如下基因序列分析和血清學(xué)鑒定。首先，通過RTPCR的方法對(duì)2012～2013年從廣西從免疫失敗的雞群中分離鑒定的15株IBV分

3、離株基因組3’端的SN基因區(qū)段(包含S1、S2、3a、3b、E、M、5a、5b和N基因)進(jìn)行擴(kuò)增、測序，應(yīng)用生物學(xué)軟件進(jìn)行相似性分析、進(jìn)化樹分析和重組分析，用在線軟件進(jìn)行O糖基化位點(diǎn)和正向選擇位點(diǎn)分析。序列測定結(jié)果顯示各分離株的S_N基因區(qū)段片段長度為6767bp～6939bp。與常用的疫苗株H120以及國內(nèi)外參考株比較，大部分毒株的S1基因廣泛存在氨基酸的缺失、替代以及插入現(xiàn)象，其它各基因片段只存在氨基酸的替代。氨基酸進(jìn)化樹表明，各基

4、因在進(jìn)化樹上不完全平行。重組分析結(jié)果顯示GXNNl30048的S1基因具有重組現(xiàn)象，來源于LX4型野毒株與疫苗株4／91的重組。O糖基化位點(diǎn)結(jié)果顯示15株IBV分離株的N蛋白都有糖基化位點(diǎn)且位點(diǎn)數(shù)量最多為21～28個(gè)。正向壓力檢測結(jié)果表明，S1蛋白的aa308位置存在正向選擇位點(diǎn)。以上結(jié)果表明15株IBV分離株九個(gè)基因已不同程度的發(fā)生變異。其次，測定20122013年15株IBV分離株的TOCID50，利用本課題組己鑒定出7種不同血清型