Src-家族酪氨酸激酶在炎性因子誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細(xì)胞生物學(xué)行為變化中的作用.pdf

1、研究背景：
　　白內(nèi)障摘除聯(lián)合人工晶狀體植入術(shù)后有約20％的病人發(fā)生晶狀體后囊膜混濁即后發(fā)性白內(nèi)障（PCO）。術(shù)后殘余的晶狀體上皮細(xì)胞增殖，遷移和纖維化生是PCO形成的主要原因。術(shù)后房水屏障的破壞以及大量炎細(xì)胞和炎性因子進(jìn)入前房參與了PCO的形成，有研究表明IL-1，IL-6和TNF-α參與了PCO形成的部分細(xì)胞生物學(xué)行為改變。Walker等在體外培養(yǎng)的雞胚晶狀體囊膜PCO模型中發(fā)現(xiàn)抑制Src-家族酪氨酸激酶（SFKs）活性可抑制

2、晶狀體上皮細(xì)胞（LECs）從前囊膜向后囊移行，從而抑制PCO的發(fā)生。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)SFKs的特異性抑制劑PP1能阻止晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡、加強(qiáng)上皮細(xì)胞與晶狀體纖維的連接、保持晶狀體上皮細(xì)胞的極性，有利于晶狀體上皮細(xì)胞在外界刺激的影響下保持其正常的上皮細(xì)胞功能從而保持晶狀體的透明?；谝陨涎芯拷Y(jié)果，我們推測SFKs參與了炎性因子誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細(xì)胞生物學(xué)行為改變，本研究將利用炎性因子刺激體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞，研究Src的激活參

3、與PCO形成的細(xì)胞機(jī)制。
　　目的：
　　探討Src-家族酪氨酸激酶異常激活在炎性因子誘導(dǎo)的晶狀體上皮細(xì)胞行為改變中的作用。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞 HLE B-3，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到刺激要求后加入含0.5%胎牛血清的培養(yǎng)液作為空白對照組，處理組分別加入10 ng/ml的IL-1a、IL-1β、IL-6、TNF-α和這四種炎性因子的混合物，PP1干預(yù)組是在加入各炎性因子之前用10μΜPP1預(yù)孵育細(xì)胞，3

4、0 min后吸棄含PP1的培養(yǎng)液，再加入含相應(yīng)炎性因子的培養(yǎng)液。用細(xì)胞活力檢測實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測LECs的增殖變化，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測LECs遷移能力的變化，細(xì)胞免疫熒光染色和Western-blotting實(shí)驗(yàn)分別定性檢測和半定量分析LECs增殖核抗原 PCNA，上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化（EMT）的標(biāo)志分子α-SMA、FN、CollagenⅣ和ZO-1的變化，以及Src活性、MMP-9的表達(dá)變化。
　　

5、結(jié)果：
　　1) IL-1α，IL-1β，IL-6和TNF-α刺激晶狀體上皮細(xì)胞Src異常激活，Src-家族酪氨酸激酶特異性抑制劑PP1能抑制這種變化。
　　2）IL-1α，IL-1β，IL-6，TNF-α和四種炎性因子混合物使晶狀體上皮細(xì)胞活力增加，促進(jìn)細(xì)胞增殖。PP1能有效抑制這種變化，抑制細(xì)胞增殖。
　　3）IL-1β，TNF-α和四種炎性因子混合物促進(jìn)晶狀體上皮細(xì)胞移行，PP1能有效抑制這些炎性因子誘導(dǎo)的晶狀體

6、上皮細(xì)胞移行。
　　4）IL-1β和TNF-α促進(jìn)晶狀體上皮細(xì)胞MMP-9高表達(dá)，PP1抑制這些炎性因子誘導(dǎo)的MMP-9的表達(dá)。
　　5）IL-1β和TNF-α使晶狀體上皮細(xì)胞α-SMA，F(xiàn)N，CollagenⅣ高表達(dá)，降低ZO-1的表達(dá)，促進(jìn)晶狀體上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。PP1能阻止IL-1β和TNF-α誘導(dǎo)的晶狀體上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。
　　結(jié)論：
　　Src-家族酪氨酸激酶的異常激活參與炎性因子 IL-1α，IL-1β，