茶葉中大腸菌群檢測方法的研究.pdf

1、我國的食品衛(wèi)生微生物標準體系主要由菌落總數(shù)、大腸菌群和致病菌三大類構(gòu)成。大腸菌群是指在37℃,24h內(nèi)能夠發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌；大腸菌群作為糞便污染指示菌，既是細菌總量指數(shù)——菌落總數(shù)的一部分，又與腸道致病菌之間有著密切的相關(guān)性，因此大腸菌群在食品微生物指標體系中占有舉足輕重的地位。 茶葉是我國的傳統(tǒng)優(yōu)勢農(nóng)副產(chǎn)品，不僅為國內(nèi)銷售的大宗產(chǎn)品，而且為我國傳統(tǒng)的出口創(chuàng)匯產(chǎn)品。然而近年來，我國茶葉出口遭

2、遇到嚴重的“綠色壁壘”，尤其是歐、美、日等國家不斷地制定更加嚴格和更廣泛的標準。我國暫還未將有害微生物列為茶葉標準中的強制性指標，但歐盟、美國、加拿大和日本已作為試檢項目，俄羅斯要求對中國茶葉檢測黃曲霉毒素和霉菌(<1000cfu/g)。根據(jù)美國和日本對我國出口茶葉的檢驗結(jié)果，我國茶葉中有害微生物主要表現(xiàn)為大腸桿菌、沙門氏桿菌等腸道感染細菌超標，出口茶葉中大腸桿菌、黃曲霉毒索均時有檢出茶葉的微生物污染情況不容樂觀。這應引起茶葉生產(chǎn)和銷售

3、單位以及有關(guān)主管部門的重視。 本文以綠茶、花茶、普洱茶和康磚茶為研究對象，對茶葉細菌總數(shù)進行了初步的調(diào)查并研究了大腸桿菌在茶葉中的存活規(guī)律；對茶葉污染大腸菌群進行初步調(diào)查并進行了各種檢測方法在茶葉檢測上的初步比較；研究探討了適合于茶葉檢測大腸菌群的檢測方法；對試驗所得茶葉大腸菌群檢測方法進行了分析與評價：最后對茶葉中的大腸菌群進行了初步鑒定。最終得出以下結(jié)論： (1)所測茶葉菌落總數(shù)在2000～200000cfu/ml，

4、各種茶葉污染程度的依次遞增順序為包裝綠茶<散裝綠茶<花茶<普洱<康磚。茶葉水分含量和多酚類物質(zhì)含量對茶葉的菌落總數(shù)有一定的影響，茶葉多酚類物質(zhì)含量與菌落總數(shù)多少呈顯著負相關(guān)性。此外，大腸標菌在茶葉中有一段時間的存活期，在一定程度上處于生長繁殖狀態(tài)?？沙霈F(xiàn)細菌數(shù)回升的情況，說明了檢測茶葉中的大腸菌群，將其作為衡量茶葉微生物衛(wèi)生狀況一個指標有一定的必要性。 (2)從茶葉大腸菌群檢測結(jié)果來看，茶葉大腸菌群污染范圍在<30～70MPN/

5、100g之間，污染程度從重到輕依次為再加工茶(花茶)>磚茶>包裝綠茶>散裝綠茶，由此看來茶葉受大腸菌群的污染程度與茶葉的加工工序及一些人為的污染途徑密切相關(guān)。經(jīng)不同方法檢測茶葉中大腸菌群的比較得出：LST法較國標法和熒光法的檢出效果好，檢出靈敏度高，LST法較適于檢測茶葉大腸菌群。但LST法和國標法的操作過程煩瑣，耗時長，有待于進一步探討更加適合茶葉大腸菌群檢測，檢出率更高，操作簡便快捷的檢驗方法。 (3)經(jīng)一般常用大腸菌群檢測

6、三種初發(fā)酵培養(yǎng)基在茶葉中大腸菌群檢測的試用比較發(fā)現(xiàn)LST相對于GB和BGLB較適合于茶葉檢測，同時本試驗進一步對其進行改良得出結(jié)論：茶葉中大腸菌群檢測的最佳初發(fā)酵培養(yǎng)基為LST+0.3％吐溫培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)時間為36小時左右，同時發(fā)現(xiàn)LST+0.3％吐溫培養(yǎng)基一步發(fā)酵檢測對茶葉大腸菌群的檢測起決定性作用，與最終的檢測結(jié)果符合率達90％左右，在茶葉大批量檢測中完全可以達到大腸菌群一步發(fā)酵檢測的效果。 由于茶葉自身特殊的原料、本身特

7、性及其加工工藝，為更加準確的測定其大腸菌群值，需要對茶葉中損傷的大腸菌群進行修復，研究發(fā)現(xiàn)用營養(yǎng)肉湯修復茶葉損傷大腸菌群的修復時間為1.5小時。 通過對改良發(fā)酵管(LST+0.3％吐溫培養(yǎng)基)進行敏感性和特異性測試發(fā)現(xiàn)：本實驗研制的改良發(fā)酵管具有較高的檢測靈敏度和較強的特異性、抗干擾性，其中檢測靈敏度可達0～5cfu/ml。 最終通過以上試驗得到我們茶葉大腸菌群檢測的新方法：營養(yǎng)肉湯修復茶葉損傷大腸菌群1.5小時——接種