水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定和大腸菌群的檢測(cè)

1、水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定和大腸菌群的檢測(cè)水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定和大腸菌群的檢測(cè)（一)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1)了解和學(xué)習(xí)水中細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群的測(cè)定原理和測(cè)定意義。(2)學(xué)習(xí)和掌握用稀釋平板計(jì)數(shù)法測(cè)定水中細(xì)菌總數(shù)的方法。(3)學(xué)習(xí)和掌握水中大腸菌群的檢測(cè)方法。（二)實(shí)驗(yàn)原理水是微生物廣泛分布的天然環(huán)境。各種天然水中常含有一定數(shù)量的微生物。水中微生物的主要來(lái)源有：水中的水生性微生物(如光合藻類(lèi))、來(lái)自土壤徑流、降雨的外來(lái)菌群和來(lái)自下水道的污染物和人畜的排泄物等

2、。水中的病原菌主要來(lái)源于人和動(dòng)物的傳染性排泄物。水的微生物學(xué)的檢驗(yàn)，特別是腸道細(xì)菌的檢驗(yàn)，在保證飲水安全和控制傳染病上有著重要意義，同時(shí)也是評(píng)價(jià)水質(zhì)狀況的重要指標(biāo)。國(guó)家飲用水標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，飲用水中大腸菌群數(shù)每升中不超過(guò)3個(gè)，細(xì)菌總數(shù)每mL不超過(guò)100個(gè)。所謂細(xì)菌總數(shù)是指1mL或1g檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)，所用的方法是稀釋平板計(jì)數(shù)法，由于計(jì)算的是平板上形成的菌落(colonyfmingunit，cfu)數(shù)，故其單位應(yīng)是cfug(mL)。它反

3、映的是檢樣中活菌的數(shù)量。所謂大腸菌群，是指在37℃24h內(nèi)能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌的總稱(chēng)，主要由腸桿菌科中四個(gè)屬內(nèi)的細(xì)菌組成，即埃希氏桿菌屬、檸檬酸桿菌屬、克雷伯氏菌屬和腸桿菌屬。水的大腸菌群數(shù)是指100mL水檢樣內(nèi)含有的大腸菌群實(shí)際數(shù)值，以大腸菌群最近似數(shù)(MPN)表示。在正常情況下，腸道中主要有大腸菌群、糞鏈球菌和厭氧芽胞桿菌等多種細(xì)菌。這些細(xì)菌都可隨人畜排泄物進(jìn)入水源，由于大腸菌群在腸道內(nèi)數(shù)量最多，所以

4、，水源中大腸菌群的數(shù)量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一項(xiàng)重要指標(biāo)。目前，國(guó)際上已公認(rèn)大腸菌群的存在是糞便污染的指標(biāo)。因而對(duì)飲用水必須進(jìn)行大腸菌群的檢查。水中大腸菌群的檢驗(yàn)方法，常用多管發(fā)酵法和濾膜法。多管發(fā)酵法可運(yùn)用于各種水樣的檢驗(yàn)，但操作繁瑣，需要時(shí)間長(zhǎng)。濾膜法僅適用于自來(lái)水和深井水，操作簡(jiǎn)單、快速，但不適用于雜質(zhì)較多、易于阻塞濾孔的水樣。(三)實(shí)驗(yàn)器材(1)菌落總數(shù)的測(cè)定：1)培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，無(wú)菌生理鹽水。2)器

5、材：滅菌三角瓶，滅菌的具塞三角瓶，滅菌平皿，滅菌吸管，滅菌試管等。(2)大腸菌群的測(cè)定；1)培養(yǎng)基：3)計(jì)數(shù)的報(bào)告：①平板菌落數(shù)的選擇：選取菌落數(shù)在30300之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)重復(fù)時(shí)，應(yīng)選取兩個(gè)平板的平均數(shù)。如果一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)作為該稀釋度的菌數(shù)。若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，可計(jì)算半個(gè)平板后乘2以代表整個(gè)平板的菌落數(shù)。②稀

6、釋度的選擇：a.應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30300之間的稀釋度，乘以該稀釋倍數(shù)報(bào)告之(表1例1)。b若有兩個(gè)稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落數(shù)均在30300之間，則視二者之比如何來(lái)決定。若其比值小于2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)；若比值大于2，則報(bào)告其中較小的數(shù)字(l例2、例3)。c若所有稀釋度的平均菌落均大于300，則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(l例4)。d若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30、則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(1

7、例5)。e.若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之（表1例6)。f.若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以該稀釋倍數(shù)報(bào)告之(表l例7)。③細(xì)菌總數(shù)的報(bào)告：細(xì)菌的菌落數(shù)在l00以?xún)?nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告；大于100時(shí)，用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)字，以四舍五入方法修約。為了縮短數(shù)字后面的0的個(gè)數(shù)，可用10的指數(shù)來(lái)表示，如表1“報(bào)告方式”一欄所示。(3)大腸菌群的測(cè)定(

8、多管發(fā)酵法)：表1稀釋度的選擇及細(xì)菌數(shù)報(bào)告方式稀釋度及菌落數(shù)101102103兩稀釋度之比菌落總數(shù)（cfug或cfumL）報(bào)告方式（菌落總數(shù)）（cfumL或cfug）1多不可計(jì)164201640016000或1.61042多不可計(jì)295461.63775038000或3.81043多不可計(jì)271602.22710027000或2.71044多不可計(jì)多不可計(jì)313313000310000或3.1105527115270270或6000＜1