三種基因型桃不同外植體再生能力初探.pdf

1、桃是我國重要的經(jīng)濟(jì)樹種。傳統(tǒng)桃樹育種由于受到育種周期長、工作量大等因素的限制導(dǎo)致進(jìn)程緩慢。現(xiàn)代生物技術(shù)，尤其是植物組織培養(yǎng)和基因工程的發(fā)展，為快速進(jìn)行桃性狀改良提供了可能。高效穩(wěn)定的再生體系是進(jìn)行轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基礎(chǔ)，但是桃屬于李屬（Prunus SPP.）果樹中離體再生比較困難的樹種，影響再生的因素成為研究的關(guān)鍵，基因型、植物生長調(diào)節(jié)劑、基本培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件等均對桃的再生有影響。本研究以‘黃水蜜’、‘秋蜜紅’和毛桃田間材料初代培養(yǎng)的葉片及

2、胚培苗的莖段、葉片、子葉、上胚軸為外植體，建立桃不同外植體再生體系，為桃遺傳轉(zhuǎn)化研究奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　1.三種基因型桃無菌材料的獲得
　　本試驗(yàn)研究了取材時期和接芽狀態(tài)、滅菌方法和培養(yǎng)基四個方面對初代培養(yǎng)的影響，結(jié)果表明：采芽接種最適宜的時期為4月下旬；將‘黃水蜜’露出5~7片葉的腋芽的莖段用升汞處理6 min后，接種到MS+6-BA1.5 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO30.5 mg/L中得

3、到最低污染率和最高萌芽率分別為11.1％和為58.7%；將‘秋蜜紅’剛抽生嫩梢的莖段用升汞處理7 min后，接種到MS+6-BA1.5 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO30.5 mg/L中得到最低污染率和最高萌芽率分別為16.7%和24.3%；將毛桃露出5~7片葉的腋芽的莖段用升汞處理7 min后，接種到MS+6-BA1.5 mg/L+ NAA0.5 mg/L+ AgNO30.5 mg/L中得到最低污染率和最高萌芽率分別為

4、19.4%和55.7%；
　　2.三種基因型桃不同外植體離體再生的研究
　　（1）莖段離體再生
　　以‘黃水蜜’桃胚培苗莖段為外植體，探討了不同植物生長調(diào)節(jié)劑質(zhì)量濃度組合對不定芽誘導(dǎo)過程中愈傷組織形成率和不定芽形成率的影響，并采用兩步生根法研究不同植物生長調(diào)節(jié)劑種類對不定根誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明，適合‘黃水蜜’桃胚培苗莖段切口處愈傷組織再生的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 mg/L+ NAA0.5 mg/L+ AgNO

5、30.5 mg/L，不定芽再生的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO30.5 mg/L，其愈傷組織形成率和不定芽再生率分別為85%和47%；獲得的不定芽先后經(jīng)WPM+ ZT2.0 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO30.5 mg/L和MS+ NAA0.5 mg/L+ GA30.5 mg/L+ AgNO30.5 mg/L兩步生根法培養(yǎng)后，不定根再生率為50%，平均根數(shù)為5.00。初步

6、建立了‘黃水蜜’桃胚培苗莖段再生體系，為桃遺傳轉(zhuǎn)化研究奠定基礎(chǔ)。
　?。?）葉片離體再生
　　本試驗(yàn)研究了不同植物生長調(diào)節(jié)劑對桃葉片愈傷組織形成率的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明：誘導(dǎo)初代培養(yǎng)桃葉片產(chǎn)生愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+ ZT3.0 mg/L+2,4-D0.6 mg/L+AgNO30.5 mg/L，其中毛桃、‘黃水蜜’和‘秋蜜紅’，愈傷組織形成率最高分別可達(dá)93.3%、70.0%和47.7%，褐化率最低分別為37.3%、50.

7、3%和48.0%；
　　本試驗(yàn)研究了不同植物生長調(diào)節(jié)劑對‘黃水蜜’、‘秋蜜紅’和毛桃三種不同基因型胚培苗葉片愈傷組織形成率和愈傷組織形態(tài)的影響，結(jié)果表明：愈傷組織形成率可達(dá)100%，根據(jù)愈傷組織形態(tài)得出胚培苗葉片愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+ ZT4.0mg/L+2,4-D0.8 mg/L+ AgNO30.5 mg/L；
　　（3）子葉離體再生
　　取培養(yǎng)45 d左右的‘黃水蜜’、‘秋蜜紅’和毛桃三種不同基因型胚培苗

8、子葉，橫切2~3刀，遠(yuǎn)軸面接觸培養(yǎng)基接種至MS+ NAA0.1 mg/L+ TDZ2.0 mg/L+ AgNO30.5 mg/L培養(yǎng)基，培養(yǎng)45 d后發(fā)現(xiàn)只有‘秋蜜紅’部分子葉切口處產(chǎn)生不定芽；
　?。?）上胚軸離體再生
　　取培養(yǎng)45 d左右的‘黃水蜜’、‘秋蜜紅’和毛桃三種不同基因型胚培苗，每個胚培苗切取1~2個上胚軸切段，切成1~2 cm長的切段，接種至MS+ NAA0.1 mg/L+6-BA2.0 mg/L+ AgN