變溫處理對(duì)葉片中柑橘碎葉病毒含量影響和脫毒效應(yīng)研究.pdf

1、柑橘碎葉病是由柑橘碎葉病毒(Citrus tatter leaf virus，CTLV)引起的一種嚴(yán)重的柑橘病害，1962年該病由Wallace和Drake在美國(guó)加利福尼亞州首次發(fā)現(xiàn)。CTLV主要通過(guò)機(jī)械、嫁接和汁液摩擦傳播，也可種子傳播。它能引起枳及其雜種作砧木的柑橘樹(shù)嫁接口不親和，葉片黃化，嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致整株植株死亡。目前尚無(wú)有效治療該病的方法，主要采用莖尖嫁接和熱處理相結(jié)合的方式進(jìn)行脫除，通過(guò)培育無(wú)毒苗木加以預(yù)防。
　　關(guān)于

2、溫度處理、莖尖嫁接處理和兩者相結(jié)合的方法脫除CTLV已有報(bào)道，也有文獻(xiàn)報(bào)道變溫組合條件脫除CTLV，但是缺少研究恒溫條件下柑橘植株的CTLV含量和溫度處理對(duì)柑橘嫩芽的CTLV含量的影響數(shù)據(jù)，也缺乏短時(shí)間變溫對(duì)脫毒效果和莖尖的影響。本研究利用實(shí)時(shí)定量RT-PCR來(lái)研究恒溫條件及變溫條件對(duì)莖尖中CTLV含量變化并通過(guò)莖尖嫁接比較其對(duì)脫毒效果的影響。具體研究結(jié)果如下:
　　(1)恒溫條件處理對(duì)柑橘甜橙植株葉片中CTLV含量的影響

3、　　光照10h/黑暗14h條件下，25℃、30℃和35℃分別處理30d后，甜橙老葉中CTLV的含量分別出現(xiàn)少量增加，下降，顯著下降，隨溫度的升高和時(shí)間的推移，病毒受到抑制或發(fā)生轉(zhuǎn)移。
　　(2)恒溫條件處理對(duì)甜橙植株嫩芽中CTLV含量和脫毒效果的影響
　　25℃處理10d和24d時(shí)，嫩芽和嫩芽旁側(cè)老葉中都檢測(cè)到CTLV，嫩芽前五葉中第一片葉CTLV含量最低，處理24d時(shí)的嫩芽前五片葉CTLV含量略低于10d。30℃處理24d

4、時(shí)，嫩芽前五葉中第一片葉的CTLV含量低于后四葉。35℃處理10d時(shí)，嫩芽前五葉未檢測(cè)到CTLV。25℃、30℃和35℃處理結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，25℃嫩芽的前五葉CTLV含量高于其他2個(gè)溫度設(shè)定，30℃處理嫩芽效果好于25℃，起到抑制CTLV作用，35℃處理甜橙嫩芽實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)不到CTLV。上述恒溫條件下，25℃和30℃的脫毒率極低，但其莖尖嫁接苗成活率高。35℃處理，脫毒率高，但莖尖嫁接成活率低。35℃處理甜橙嫩芽的脫毒效果

5、最好。
　　(3)變溫條件處理對(duì)甜橙植株嫩芽中CTLV含量和脫毒效果的影響
　　常規(guī)熱處理(40℃10h/30℃14h)甜橙植株30d時(shí)，嫩芽第一、二片葉未檢測(cè)到CTLV，嫩芽旁側(cè)老葉CTLV含量高于嫩芽前五葉CTLV含量。40℃4h/25℃4h處理甜橙植株30d和50d時(shí)，嫩芽前五葉中第一片葉未檢測(cè)到CTLV，且嫩芽旁側(cè)老葉都檢測(cè)到CTLV。40℃4h/30℃4h處理甜橙植株30d時(shí)，嫩芽第一、二片葉未檢測(cè)到CTLV，處理