柑橘裂皮病毒侵染對寄主基因表達的影響研究.pdf

1、柑橘裂皮類病毒（Citrus exocortis viroid,CEVd）是對柑橘生產(chǎn)造成危害的主要致病因子，導(dǎo)致植株矮化、樹莖減少、裂皮、樹勢衰弱和大量落花落果，嚴(yán)重減產(chǎn)，給柑橘生產(chǎn)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。本研究采用基因芯片技術(shù)分析了CEVd強毒株系對柑橘基因表達譜的影響，探究CEVd與柑橘互作過程所影響到的相關(guān)基因，為明確其致病機理奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:
　　1、以具有強毒株系特征的CEVd分子變種CEVd.01為試材，將其二

2、聚體化后進行體外轉(zhuǎn)錄，機械接種至以枳殼為砧木的香櫞861嫩芽上，接種3個月后進行RT-PCR檢測驗證及癥狀觀察。RT-PCR檢測結(jié)果表明接種樣品ZK1、ZK2和ZK3的枳殼苗均獲得了預(yù)期大小的目標(biāo)片段，而陰性樣品CK1、CK2和CK3枳殼苗未檢測出目標(biāo)片段。將檢測得到的目標(biāo)片段進行回收克隆并測序，確證CEVd.01接種成功。
　　2、接種成功后，選取陰性對照植株CK1、接種陽性植株ZK1和分離物CEVd.01的毒源植株CK+進行差

3、異表達分析。分別選取三個時間點，每個時間點相隔31天收集枳殼苗葉片，收集葉片時對上中下部的葉片同時收集混合在一起送交公司進行基因芯片分析。結(jié)果顯示CEVd侵染后引起枳殼基因表達水平的顯著改變，而毒源材料相關(guān)基因的表達改變水平明顯強于接種材料;其中上調(diào)基因主要涉及植物防御信號途徑相關(guān)基因;下調(diào)基因主要包括糖類（纖維、果膠、木糖等）、蛋白（微管蛋白、伸展蛋白、成束蛋白等）、激素（乙烯、赤霉素和煙酰胺）、細胞色素、氧化還原酶、過氧化物酶和幾丁

4、質(zhì)酶等代謝相關(guān)基因。
　　3、選取從功能上與植株生長和細胞壁合成相關(guān)的5個顯著下調(diào)的基因作為候選基因，包括木糖苷酶(Glycometabolism)、果膠酯酶(Pectinesterase)、乙烯響應(yīng)元件結(jié)合因子(ERF-like protein)、煙酰胺合酶基因NAS(Nicotianamine synthase 1)以及聚半乳糖醛酸酶（Polygalacturonase），間隔31天分3個時間點收集材料，以18sRNA為內(nèi)參采