生物金屬化增強(qiáng)電化學(xué)免疫傳感器信號(hào)的研究.pdf

1、對(duì)蛋白質(zhì)的檢測(cè)在生命科學(xué)領(lǐng)域具有重要的意義。目前，已經(jīng)有一些重要的對(duì)蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法，比如放射免疫分析，酶聯(lián)免疫分析等。但是，隨著生命科學(xué)的發(fā)展，這些方法的缺點(diǎn)已經(jīng)越來(lái)越明顯，這使得這些方法的應(yīng)用受到了一定的限制，尤其是在一些高靈度檢測(cè)的領(lǐng)域比如對(duì)疾病的早期診斷方面。所以，很有必要建立一些具有高靈敏度、易操作和有通用性的蛋白質(zhì)檢測(cè)方法。顯然，對(duì)免疫傳感器的信號(hào)進(jìn)行增強(qiáng)會(huì)大大改善它的靈敏度。電化學(xué)裝置因?yàn)榫哂泻?jiǎn)單、靈敏和易于微型化的優(yōu)點(diǎn)，

2、正越來(lái)越受到人們的關(guān)注。毫無(wú)疑問(wèn)，對(duì)電化學(xué)免疫傳感器進(jìn)行信號(hào)增強(qiáng)技術(shù)研究會(huì)加快免疫分析的進(jìn)步。本研究在增強(qiáng)免疫電化學(xué)傳感的信號(hào)方面做了以下三個(gè)方面的工作： 第一部分：提出了一種基于適配體識(shí)別和生物催化金屬沉積的電化學(xué)免疫傳感對(duì)血小板源生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)進(jìn)行高靈敏檢測(cè)。在本方法中，首先把固定抗體固定到電極的表面，接著，依次把抗原和生物素標(biāo)記的適配體溶液滴加到電極表面進(jìn)行反應(yīng)以形成免疫復(fù)合物。然后，通過(guò)生物素和親合素的特

3、異性反應(yīng)，把親合素標(biāo)記的堿性磷酸酶固定到電極表面。堿性磷酸酶可以催化抗壞血酸磷酸酯鎂(AA-P)水解成抗壞血酸，后者把溶液中的銀離子還原成金屬單質(zhì)沉積到電極的表面。最后用線性掃描伏安法對(duì)電極表面沉積的金屬銀進(jìn)行測(cè)量?；谏锝饘倩母哽`敏度，本方法在對(duì)PDGF-BB的檢測(cè)中，在1到1000ng/mL的范圍保持很好的線性關(guān)系，檢測(cè)下限為0.8ng/mL。 第二部分：提出了一種基于功能化的硅納米粒子的免疫傳感器對(duì)前列腺特異性抗原(P

4、SA)進(jìn)行檢測(cè)。在這種方法中，第一次提出了同時(shí)修飾上了檢測(cè)抗體和堿性磷酸酶兩種物質(zhì)的硅納米粒子用于對(duì)PSA電化學(xué)免疫檢測(cè)。當(dāng)固定抗體通過(guò)一層自組裝單分子膜被連接到電極的表面上以后，接著通過(guò)一個(gè)免疫夾心反應(yīng)把堿性磷酸酶固定到電極的表面。當(dāng)ALP酶催化AA-P水解生成抗壞血酸以后，銀離子在電極的表面被還原。最后，在電極表面沉積的金屬銀的量與被固定到電極表面的抗原的量成一定的比例關(guān)系。因?yàn)楸痉椒ㄖ杏肧i NPs來(lái)作為酶的載體，可以極大的提高檢

5、測(cè)的靈敏度，電化學(xué)峰電流和抗原濃度在1到35ng/mL范圍內(nèi)保持良好線性關(guān)系，檢測(cè)下限為第三部分：提出了一種基于脂質(zhì)體包埋堿性磷酸酶和生物催化金屬沉積的超靈敏免疫傳感器。為了對(duì)這種提出來(lái)的免疫分析方法的可行性進(jìn)行檢測(cè)，采用免疫夾心反應(yīng)的原理對(duì)PSA這目標(biāo)檢測(cè)物進(jìn)行了檢測(cè)。當(dāng)固定抗體、抗原和檢測(cè)抗體修飾的脂質(zhì)體在電極的表面形成免疫夾心復(fù)合物以后，向電極的表面滴加表面活性劑，使脂質(zhì)體破裂釋放出所包含的堿性磷酸酶，接著利用堿性磷酸酶的催化特性