Angiopoietin在原發(fā)性肝癌血管生成和轉(zhuǎn)移中的作用初步研究.pdf

1、華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文Angiopoietin在原發(fā)性肝癌血管生成和轉(zhuǎn)移中的作用初步研究姓名：彭林申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：裘法祖2001.4.1華中科技夫掌罔濟匪掌霸B翻l士掌位詫’文f本研究選擇本身不表達(dá)Angiopoietin的肝癌細(xì)胞系SM赫C7721，通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染方法將Angiopoietin基因?qū)隨MMC7721肝癌細(xì)胞系，并用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞克隆，成功構(gòu)建了攜帶Angiop

2、oietin基因并穩(wěn)定表達(dá)的SMMC772l肝癌細(xì)胞系。用RTPCR方法從RNA水平以及用免疫熒光法從蛋白水平均可以證實新構(gòu)建的肝癌細(xì)胞系攜帶了Angiopoietin基因并能穩(wěn)定表達(dá)其蛋白產(chǎn)物。由于Angiopoietin的Tie2受體是血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性分布的，有必要了解攜帶Angiopoietin基因的肝癌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的相互作用。通過SMMC7721肝癌細(xì)胞對臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(采用原代培養(yǎng)23代之細(xì)胞)的小孔趨化分析實

3、驗，我們觀察到有Ang1基因表達(dá)的SMMC7721細(xì)胞對血管內(nèi)皮細(xì)胞的趨化作用比未轉(zhuǎn)染Ang1基因之前明顯增強(P005)。這表明Ang1對血管肉皮細(xì)胞有趨化作用而且這種趨化作用可以被其抗體所拮抗轉(zhuǎn)染Ang。2基因前后SMMC7721細(xì)胞對血管內(nèi)皮細(xì)胞的趨化作用沒有明顯差異(P005)。為了更好地區(qū)分正常的肝臟血管和腫瘤新生血管，我們以Walker256癌肉瘤制造原位種植肝癌模型，采用免疫組織化學(xué)染色檢測血管平滑肌激動蛋白(Smooth

4、MuscleAetin，?！維MA)作為腫瘤新生血管的特異性標(biāo)志物。正常血管形態(tài)較規(guī)則，血管內(nèi)皮周圍有較多的o【SMA表達(dá)。新生血管管壁較薄，呈現(xiàn)出扭曲、折疊等不規(guī)則形態(tài)且血管內(nèi)皮周圍缺乏c【SMA表達(dá)。將轉(zhuǎn)染了Angiopoietin基因的SMMC772l肝癌細(xì)胞注射于小鼠皮下產(chǎn)生腫瘤結(jié)節(jié)，表達(dá)Ang2者腫瘤組織中新生血管的數(shù)量較未轉(zhuǎn)染前明顯增多；而表達(dá)Ang1基因者轉(zhuǎn)染前后腫瘤組織中新生血管的數(shù)量無顯著性差異。這表明Ang2的表達(dá)促