與茶葉香氣形成有關(guān)的β-葡萄糖苷酶活性研究及其基因表達(dá).pdf

1、茶樹(shù)葉片中的大部分揮發(fā)性香氣成分是以糖苷類(lèi)香氣前體的形式存在，且以葡萄糖苷和櫻草糖苷為主。β-葡萄糖苷酶水解葡萄糖苷香氣前體釋放出的揮發(fā)性苷元，不僅是構(gòu)成茶葉香氣的物質(zhì)基礎(chǔ)，更參與茶樹(shù)自身防御體系，增強(qiáng)茶樹(shù)抗病性。因此，β-葡萄糖苷酶在茶葉香氣的形成和茶樹(shù)抗逆性方面有著至關(guān)重要的作用。
　　本文對(duì)茶樹(shù)體內(nèi)β-葡萄糖酶生物活性進(jìn)行了研究，在分子生物學(xué)方面研究了β-葡萄糖苷酶基因(Glu)表達(dá)量并對(duì)其進(jìn)行了體外克隆表達(dá)，主要結(jié)果如下:

2、
　　紅茶加工過(guò)程中，β-葡萄糖酶活性在萎凋階段達(dá)到最高峰，揉捻、發(fā)酵階段活性持續(xù)下降，順-3-己烯醇、苯甲醇、2-苯乙醇、芳樟醇、水楊酸甲酯、香葉醇等香氣成分含量持續(xù)增加，表明β-葡萄糖苷酶能有效水解葡萄糖苷類(lèi)香氣前體釋放出香氣成分。
　　不同品種不同葉位的β-葡萄糖苷酶活性和Glu基因表達(dá)量，大致呈現(xiàn)出新梢越幼嫩的葉位活性和表達(dá)量越高的規(guī)律;另外，安徽一號(hào)、福鼎大白茶、山坡綠的β-葡萄糖苷酶活性、Glu基因表達(dá)量高于龍井

3、43。
　　生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示Glu為親水性蛋白，且存在兩個(gè)明顯的跨膜結(jié)構(gòu)域，為跨膜蛋白，有24個(gè)磷酸化位點(diǎn)，前26個(gè)氨基酸為信號(hào)肽序列。成功構(gòu)建去信號(hào)肽pMAL-Glu原核表達(dá)載體，用IPTG在37℃下誘導(dǎo)得到以包涵體形式存在的蛋白，經(jīng)條件優(yōu)化后在16℃下誘導(dǎo)得到可溶性蛋白。
　　成功構(gòu)建真核表達(dá)載體pESC-Glu，并導(dǎo)入釀酒酵母INVSc1中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)和活性驗(yàn)證，得到反應(yīng)30min后pESC-Glu蛋白相對(duì)酶活性