妊娠期高血壓疾病中基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其組織抑制物-1、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1表達(dá)關(guān)系的研究.pdf

1、目的:妊娠期高血壓疾病是造成孕期女性和圍生兒患病和死亡的主要原因之一，嚴(yán)重影響女性妊娠期各個(gè)系統(tǒng)的生理功能及圍生兒的健康發(fā)育。經(jīng)過(guò)國(guó)內(nèi)外科研工作者們不懈的努力，有關(guān)胎盤或滋養(yǎng)細(xì)胞缺血、免疫、遺傳及氧化應(yīng)激等幾個(gè)方面的學(xué)說(shuō)被認(rèn)為是導(dǎo)致該病的主要原因，其中人們一般認(rèn)為胎盤或滋養(yǎng)細(xì)胞缺血在發(fā)病機(jī)制中占據(jù)關(guān)鍵地位。妊娠是一個(gè)極為復(fù)雜多變的生理過(guò)程，在這個(gè)過(guò)程中多種原因造成滋養(yǎng)細(xì)胞不能充分完成浸潤(rùn)過(guò)程，子宮螺旋動(dòng)脈生理性重鑄過(guò)程不能充分地進(jìn)行，胎

2、盤不能深入植入引起胎盤缺血?；|(zhì)金屬蛋白酶-9(martix metalloproteinases-9，MMP-9)可快速有效的降解細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)，是滋養(yǎng)細(xì)胞充分浸潤(rùn)過(guò)程中的重要角色，參與了子宮螺旋動(dòng)脈重建和胎盤形成?；|(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1)是MMP-9的特異性抑制物，主要作用是可以有效的對(duì)

3、MMP-9的含量和活性進(jìn)行抑制調(diào)節(jié)，滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲行為正常進(jìn)行有賴于兩者含量的平衡表達(dá)。發(fā)現(xiàn)于1981年的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growthfactor-β1，TGF-β1)是一種具有多樣性功能的、由多細(xì)胞合成分泌的生長(zhǎng)因子，在細(xì)胞生長(zhǎng)分化、細(xì)胞外基質(zhì)生成、炎癥反應(yīng)、機(jī)體免疫、間質(zhì)纖維化和腫瘤血管形成等各方面具有廣泛的調(diào)節(jié)作用。本文的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖峭ㄟ^(guò)研究MMP-9、TIMP-1和TGF-β1在正常對(duì)照組、子癇前期輕

4、度組、子癇前期重度組胎盤組織中的表達(dá)變化情況，認(rèn)真探討三者相互聯(lián)系和彼此之間的關(guān)系，仔細(xì)分析它們對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)過(guò)程的影響，詳細(xì)闡述它們?cè)谌焉锲诟哐獕杭膊≈兴l(fā)揮的作用，為該病的更深入研究和有效的防范治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.在2011年12月-2013年6月期間，分別選擇正常對(duì)照組、子癇前期輕度和重度患者各30例（三組研究對(duì)象均除外其他疾?。Ｋ薪M織全部在胎盤娩出后的30分鐘之內(nèi)采取，采取部位選擇母體面中央、

5、臍帶附著處，采集標(biāo)本體積約1cm×1cm×1cm，采集時(shí)注意無(wú)菌操作并避開(kāi)梗死、出血及鈣化的部位，放置于10％的中性福爾馬林中浸泡24-48小時(shí)，包埋在石蠟中，4μm連續(xù)切片。
　　2.應(yīng)用免疫組織化學(xué)（immunohi stochemi stry，IHC）SP法（鏈霉菌抗生物素蛋白—過(guò)氧化酶連接法）檢測(cè)需要研究的標(biāo)本中MMP-9、TIMP-1和TGF-β1的表達(dá)強(qiáng)度，根據(jù)觀察到的陽(yáng)性細(xì)胞百分比和細(xì)胞內(nèi)染色強(qiáng)度分級(jí)。
　　3

6、.應(yīng)用Excel來(lái)處理所有的數(shù)據(jù)，并利用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，使用單因素方差分析對(duì)計(jì)量資料進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用Kruskal-wallis H檢驗(yàn)、Wilcoxon秩和檢驗(yàn)及Fisher's精確概率計(jì)算，應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析方法對(duì)兩個(gè)變量之間的相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用α=0.05作為檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)P≤0.05時(shí)，代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;當(dāng)P≤0.01時(shí)，表示差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義非常顯著。
　　結(jié)果:
　　1.

7、臨床一般資料比較:本實(shí)驗(yàn)研究的三組孕婦中，其平均年齡和平均分娩孕周的差異均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.MMP-9的表達(dá)
　　2.1 MMP-9集中分布在合體滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜細(xì)胞、絨毛的間質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞中，主要是在這些細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。MMP-9表達(dá)在子癇前期輕度組和重度組中的陽(yáng)性率依次是70.00％、36.67％，與正常對(duì)照組的96.67％陽(yáng)性率相比，均表現(xiàn)顯著差異(P=0.014＜0.05，P=

8、0.001＜0.05)。
　　2.2 MMP-9在對(duì)照組、輕度組和重度組中都可以表達(dá)，但表達(dá)的情況在三組中不同，三組表達(dá)率相比差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著性意義(P=0.002＜0.05)。更深入的對(duì)三者進(jìn)行兩兩比較，發(fā)現(xiàn):與正常妊娠組相比，子癇前期輕度組、重度組中MMP-9的含量均減少明顯(P=0.013＜0.05，P=0.008＜0.05)，并且伴隨疾病的不斷進(jìn)展，MMP-9的表達(dá)呈降低趨勢(shì):在子癇前期重度組中的表達(dá)程度顯著低于輕度

9、組（P=0.015＜0.05）。
　　3.TIMP-1的表達(dá)
　　3.1 在所觀察的組織中TIMP-1和MMP-9的分布、陽(yáng)性顆粒定位基本相同。TIMP-1表達(dá)在子癇前期輕度組和重度組中的陽(yáng)性率依次是73.33％、90.00％，與正常對(duì)照組的40.00％陽(yáng)性率相比，均表現(xiàn)顯著差異(P=0.011＜0.05, P=0.005＜0.05)。
　　3.2 TIMP-1在對(duì)照組、輕度組和重度組中都可以表達(dá)，但表達(dá)的情況在三組中

10、不同，三組表達(dá)率相比差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著性意義(P=0.004＜0.05)。更深入的對(duì)三者進(jìn)行兩兩比較，發(fā)現(xiàn):與正常妊娠組相比，子癇前期輕度組、重度組中TIMP-1的含量均增加明顯（P=0.024＜0.05，P=0.018＜0.05），并且伴隨疾病的不斷進(jìn)展，TIMP-1的表達(dá)呈不斷增加趨勢(shì):在子癇前期重度組中的表達(dá)程度顯著高于輕度組（P=0.027＜0.05）。
　　4.TGF-β1的表達(dá)
　　4.1 所觀察的絨毛的間質(zhì)

11、細(xì)胞、蛻膜細(xì)胞、滋養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中都出現(xiàn)了TGF-β1的表達(dá)，還可以在血管的內(nèi)皮細(xì)胞中觀察到數(shù)目略少的表達(dá)。TGF-β1表達(dá)在子癇前期輕度組和重度組中的陽(yáng)性率依次是76.67％、93.33％，與正常對(duì)照組的33.33％陽(yáng)性率相比，均表現(xiàn)顯著差異(P=0.010＜0.05, P=0.002＜0.05)。
　　4.2 TGF-β1在對(duì)照組、輕度組和重度組中都可以表達(dá)，但表達(dá)的情況在三組中不同，三組表達(dá)率相比差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯

12、著性意義(P=0.001＜0.05)。更深入的對(duì)三者進(jìn)行兩兩比較，發(fā)現(xiàn):與正常妊娠組相比，子癇前期輕度組、重度組中TGF-β1的含量均增加明顯(P=0.022＜0.05，P=0.014＜0.05)，并且伴隨疾病的不斷進(jìn)展，TGF-β1的表達(dá)呈不斷增加趨勢(shì):在子癇前期重度組中的表達(dá)程度顯著高于輕度組（P=0.036＜0.05）。
　　5.MMP-9和TIMP-1呈負(fù)相關(guān),MMP-9和TGF-β1呈負(fù)相關(guān)，TIMP-1和TGF-β1呈

13、正相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.MP-9、TIMP-1和TGF-β1在對(duì)照組、子癇前期輕度組和重度組的胎盤組織中均有表達(dá)，并且表達(dá)強(qiáng)度在三組之間存在顯著性差異。
　　2.MMP-9與TIMP-1、MMP-9與TGF-β1在胎盤組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，TIMP-1與TGF-β1呈正相關(guān)關(guān)系。在正常對(duì)照組中，MMP-9高表達(dá)，TIMP-1和TGF-β1低表達(dá);子癇前期輕度組和重度組，MMP-9的表達(dá)隨病情發(fā)展而降低，TIMP-