次級淋巴組織趨化因子真核表達及抗宮頸癌作用的實驗研究.pdf

1、目的：構建次級淋巴組織趨化因子[SLC]的真核表達載體pcDNA3.1(-)-SLC，表達制備SLC，進而研究該質粒在小鼠抗宮頸癌免疫中的作用。 方法：限制性內(nèi)切酶EcoRI,BamHI 將SLC 片段從pSG5-SLC 上酶切下來，用連接酶將其重組到pcDNA3.1(-)，構建了pcDNA3.1(-)-SLC 真核表達載體。在體外用電穿孔的方法將pcDNA3.1(-)-SLC 轉入到人宮頸癌細胞Hela 中，培養(yǎng)、分泌表達SL

2、C于培養(yǎng)液中，用westernblot 鑒定。向BALB/C 小鼠右側腋下瘤體中多次分別注入不同濃度的重組SLC 質粒，通過流式細胞儀檢測小鼠血液、脾臟中的免疫細胞比例,研究趨化因子在腫瘤免疫中起到的全身效應，通過腫瘤生長比較，研究趨化因子SLC的局部效應。 結果：將構建好的pcDNA3.1(-)-SLC 用EcoRI,BamHI 雙酶切后電泳，可觀察到約400bp 及5300bp 兩條帶，其中約400bp 為SLC 基因片段，

3、約5300bp 為pcDNA3.1(-)空載體。表明pcDNA3.1(-)-SLC 真核表達載體構建成功。經(jīng)電穿孔轉染表達后，westernblot 可見特異性結合條帶，與理論預期值相符，證明其可以在體外表達；將質粒注入腫瘤瘤體，可觀察到以下現(xiàn)象：與生理鹽水對照組相比，小鼠血液與脾臟淋巴細胞比例明顯降低，小鼠腫瘤生長明顯受抑，而且注射SLC 的量越大，抑瘤效果越明顯。 結論：成功構建了SLC 真核表達載體，在宮頸癌細胞Hela