烏拉坦誘導小鼠肺癌模型的研究.pdf

1、肺癌是嚴重威脅人類生命健康的惡性腫瘤,近年來發(fā)病率及死亡率逐年上升。肺癌動物模型對肺癌的發(fā)病機理研究及治療藥物篩選非常重要,但目前常用的肺癌模型中移植性腫瘤長勢過快,與臨床腫瘤差異很大;自發(fā)性與誘導性腫瘤發(fā)病率和成瘤時間很不穩(wěn)定。因此,建立一種與臨床肺癌生物學特征相似、致瘤穩(wěn)定均一、重現性好、發(fā)病率高的肺癌動物模型對于研究肺癌的病因及篩選肺癌治療藥物,尤其是篩選十分有特色的肺癌治療傳統(tǒng)中藥是腫瘤領域的迫切需要。
　　本研究采用不同

2、劑量烏拉坦、不同品系小鼠及不同致癌方案比較肺致癌率及平均肺結節(jié)數以確定最佳肺癌造模方法;通過生化指標檢測及病理組織分析比較烏拉坦誘導的肺癌模型與臨床人體肺癌發(fā)病的相似性;并通過寒熱2種性質的中藥對建立的肺癌模型進行佐證,提出肺癌新的發(fā)病機制,以期為臨床肺癌的治療提供新理念、新方法。
　　在本研究中,烏拉坦800mg/kg腹腔注射、每周兩次、連續(xù)5周的造模方式可在C57BL/6小鼠中4個月誘導出穩(wěn)定均一、致癌率100％的肺腺癌,并能

3、克服C57BL/6小鼠對烏拉坦誘導肺癌的基因抵抗。肺癌小鼠體內生化指標檢測表明,該模型建立后荷瘤小鼠ColI、MMP-9、TIMP-1、NGF、TrkA、BDNF、TrkB、TGF-β1、bFGF、Ins、Glut-4水平均顯著升高,肺組織LN、血清TC水平顯著降低,且隨著時間的延長與正常小鼠差異越顯著。病理及免疫組化檢測表明,該模型中誘導的小鼠肺癌符合臨床中分化肺腺癌特征,表現為完整的腺囊結構、侵潤性較低、部分瘤細胞充滿囊腔,免疫組化

4、TTF-1(+)、CEA(+)、P63(-)。在模型建立過程中,小鼠逐漸畏寒喜暖、蜷縮少動、尾部及耳廓血管暗紫、體溫下降、ATP酶及LDH活性降低、全血粘度及紅細胞聚集指數升高、微循環(huán)障礙等,表現出寒凝血瘀的中醫(yī)學體征。溫熱藥附子可減弱寒凝血瘀體征及不同程度改善肺組織中ColI、MMP-9、TIMP-1、NGF、BDNF、TGF-β1、LN異常水平,阻止腫瘤進程;寒涼藥蒲公英加重寒凝血瘀體征,有促進腫瘤進展的趨勢。
　　為了驗證拓

5、展腫瘤的惡熱喜寒特性,我們用烏拉坦400μg/ml處理人正常肝L02細胞建立轉化細胞系,該轉化細胞能在軟瓊脂上形成集落,線粒體數量增多,具有腫瘤細胞的一些惡性特質。明膠電泳及western blot結果顯示轉化細胞內MMP-9及TGF-β1表達明顯多于正常細胞。另外,我們發(fā)現,與37℃比較,32℃培養(yǎng)能提高烏拉坦對L02細胞的轉化率。
　　綜上所述,烏拉坦800mg/kg腹腔注射、每周兩次、連續(xù)5周的造模方式可建立致瘤穩(wěn)定均一、重