Pristane誘導(dǎo)小鼠狼瘡模型的建立及其免疫細(xì)胞功能變化的研究.pdf

1、目的：建立Pristane誘導(dǎo)的小鼠系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)模型；觀察該模型各器官組織的炎癥病理變化特點；觀察該模型各部位免疫細(xì)胞的組成變化；檢測該模型淋巴細(xì)胞共刺激分子的表達(dá)及脾臟T細(xì)胞的活化程度；觀察絲裂原(LPS和Con A)刺激對脾淋巴細(xì)胞免疫功能的影響。
　　方法：⑴狼瘡模型的建立、生物學(xué)鑒定及其器官組織免疫和病理學(xué)檢查：0.5 ml Pristane單次腹腔注射雌性BALB/c小鼠構(gòu)建小鼠狼瘡模型(對照組注射等量的生理

2、鹽水NS)；注射前及注射后每月ELISA法檢測血清抗dsDNA抗體和抗Sm/RNP抗體含量，Albustix試紙法檢測尿蛋白含量；6個月后處死全部小鼠，解剖、肉眼觀察其胸、腹腔臟器組織病變情況，并取肝、脾、肺、腎、小腸及其他病變組織做HE染色觀察其組織炎癥病理變化；直接熒光染色法觀察腎臟免疫復(fù)合物(IC)沉積及肝、肺和小腸組織T、B細(xì)胞浸潤程度；半定量RT-PCR檢測肝、肺和小腸組織炎癥性細(xì)胞因子IL-6 mRNA和Ⅰ型干擾素刺激基因(

3、ISGs) Mx1 mRNA的表達(dá)水平。⑵模型組小鼠免疫細(xì)胞組成和功能變化的研究：流式細(xì)胞術(shù)檢測造模3個月時模型組小鼠脾臟T細(xì)胞的活化程度，造模3個月和6個月時脾臟T細(xì)胞表面共刺激分子CD28、CD154、CD137和B細(xì)胞表面共刺激分子CD40、CD137L的表達(dá)，以及造模6個月時外周血、脾臟和腹腔灌洗液中各免疫細(xì)胞的組成變化；RT-PCR檢測造模6個月時脾臟CD137 mRNA和CD137L mRNA的表達(dá)水平；流式細(xì)胞術(shù)檢測造模6

4、個月時模型組小鼠外周血和腹腔灌洗液中淋巴細(xì)胞表面共刺激分子的表達(dá)；MTT法和流式細(xì)胞術(shù)檢測模型組小鼠脾淋巴細(xì)胞在絲裂原刺激下的增殖、活化、共刺激分子表達(dá)和凋亡。
　　結(jié)果：①模型組小鼠出現(xiàn)多種SLE樣臨床癥狀和體征，并發(fā)生肝、肺等器官組織炎癥反應(yīng)：模型組小鼠造模3個月～6個月時血清抗Sm/RNP抗體和4個月～6個月時血清抗dsDNA抗體較對照組明顯增高(P<0.01)；造模6個月時其蛋白尿(≥+)陽性率和關(guān)節(jié)病變陽性率均顯著高于對

5、照組(P<0.01)；器官組織檢查發(fā)現(xiàn)，造模6個月時>50％的模型組小鼠出現(xiàn)不同程度的腎小球腎炎病變伴毛細(xì)血管壁大量IC沉積，且大多數(shù)模型組小鼠出現(xiàn)脾腫大，肝、肺和小腸組織T、B細(xì)胞浸潤，IL-6 mRNA和Mx1 mRNA表達(dá)上調(diào)及腹腔產(chǎn)生大量脂肪肉芽腫結(jié)節(jié)等器官組織炎癥反應(yīng)，而對照組未見這些病變。②模型組小鼠免疫細(xì)胞組成和功能明顯異常：與對照組相比，造模3個月時模型組小鼠脾臟T細(xì)胞明顯活化(P<0.05)；造模6個月時模型組小鼠脾臟

6、中T、B細(xì)胞明顯減少(P<0.05)，漿細(xì)胞明顯增多(P<0.05)，外周血樹突狀細(xì)胞和漿細(xì)胞明顯增多(p<0.05)，腹腔灌洗液中T細(xì)胞、漿細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞明顯增多(P<0.05)，B細(xì)胞明顯減少(P<0.05)，且各部位成熟樹突狀細(xì)胞均明顯增多(P<0.05)；造模6個月時模型組小鼠脾臟T細(xì)胞上CD28表達(dá)明顯減少(P<0.05)，CD137表達(dá)明顯增多(P<0.01)，B細(xì)胞上CD40表達(dá)明顯減少(P<0.01)，CD137L表達(dá)

7、明顯增多(P<0.05)，且其脾臟CD137 mRNA和CD137L mRNA表達(dá)上調(diào)；造模6個月時模型組小鼠外周血淋巴細(xì)胞上述幾種共刺激分子的表達(dá)與脾臟基本一致，而腹腔灌洗液中T細(xì)胞表達(dá)CD28不是減少而是明顯增多(P<0.05)；模型組小鼠脾淋巴細(xì)胞在絲裂原刺激下的增殖、活化和凋亡均較對照組明顯增強(qiáng)(P<0.05)，且絲裂原刺激不能糾正模型組小鼠脾淋巴細(xì)胞表面所有共刺激分子的表達(dá)異常。
　　結(jié)論：Pristane能成功誘發(fā)BA