華支睪吸蟲感染小鼠模型的建立及其免疫機制的初步研究.pdf

1、目的:本研究擬建立華支睪吸蟲感染小鼠的動物模型，通過對感染后抗體及亞類水平的動態(tài)檢測，了解華支睪吸蟲感染后免疫狀態(tài)，運用免疫病理技術探討華支睪吸蟲分泌/排泄抗原在致病中的作用。 方法: (1)建立華支睪吸蟲感染小鼠模型：選取BALB/c、C57BL/6、昆明鼠三個品系小鼠，分別以不同數(shù)量華支睪吸蟲囊蚴經口感染；感染后20～30d，收集小鼠糞便，以NaOH消化法檢查蟲卵、計數(shù)并觀察蟲卵檢出率的變化。 (2)ELIS

2、A法測定不同品系小鼠感染前、感染后4、8、12w血清中抗體IgG、IgG1/IgG2a的動態(tài)變化。 (3)制備華支睪吸蟲分泌排泄抗原(ESA)和兔抗ESA血清：自人工感染華支睪吸蟲的豚鼠肝臟無菌取出發(fā)育良好的蟲體，放入無菌Ringer's液，37℃培養(yǎng)24h，收集培養(yǎng)液，12000rpm，4℃，離心10min，上清液即為ESA。將ESA與等量完全弗氏佐劑充分乳化后，皮內多點法免疫新西蘭兔，制備兔抗華支睪吸蟲ESA血清。

3、(4)常規(guī)法制備感染小鼠肝組織石蠟切片，HE染色后觀察感染各期小鼠肝臟病變：同時采用免疫組化法，檢測ESA在感染各期小鼠肝臟中的定位情況。 結果: (1)BALB/c、C57BL/6、昆明鼠糞檢蟲卵陽性率分別為79.2％、12.5％、37.5％，三個品系間有顯著性差異。 (2)三個品系小鼠血清IgG均于感染后第4～8w升高，約在第10w達到高峰，此后開始下降并維持至觀察結束的第12w；IgG1/IgG2a值感染后

4、逐漸增高，并持續(xù)至第12w。 (3)病理學觀察結果：感染組BALB/c和昆明鼠肉眼可見肝臟腫大，鏡下于4w出現(xiàn)膽管擴張，上皮脫落壞死，膽管周圍炎細胞浸潤；8w膽管顯著增生，管壁內有數(shù)量不等的炎細胞：12w管壁的炎性細胞減少，纖維增多，管壁增厚；C578L/6末見明顯改變；免疫組化結果：華支睪吸蟲感染小鼠后，產生的ESA定化于小鼠的膽管內，抗原量隨著感染時間的延長而增多。 結論: (1) BABL/c小鼠對華支睪吸