華支睪吸蟲感染小鼠Th1-Th2細(xì)胞因子的動態(tài)變化及其免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:本研究擬應(yīng)用華支睪吸蟲感染小鼠動物模型，對感染后小鼠Th1/Th2細(xì)胞因子、血清抗體及亞類水平和T 細(xì)胞亞群進(jìn)行動態(tài)觀察，了解華支睪吸蟲感染后宿主的免疫狀態(tài)，探討調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞在華支睪吸蟲感染免疫極化現(xiàn)象及其免疫調(diào)節(jié)機(jī)制中的作用。
　　 方法:
　　 （1）Th1/Th2 細(xì)胞因子的動態(tài)觀察：BALB / c 小鼠隨機(jī)分為感染組和對照組，經(jīng)口感染華支睪吸蟲囊蚴30 條/鼠，分別于感染后第0d、4d，1w、2w、4w

2、、8w、12w 剖殺實(shí)驗(yàn)組小鼠5 只和對照組小鼠4 只，分離脾臟組織單個核細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106/mL，用含10％ FBS，10 mM HEPES，2 mM L-glutamine，100 units/mL 青霉素和100 μg/mL 鏈霉素的RPMI 1640 培養(yǎng)基于96 孔培養(yǎng)板培養(yǎng)，37℃、5％ CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，-70℃保存?zhèn)溆?。其中，?shí)驗(yàn)組小鼠脾細(xì)胞分為ConA（5μg/mL）刺激組和ESA

3、（30μg/mL）刺激組，對照組不加任何刺激。雙抗體夾心ELISA 法測定脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-12，IFN-γ和IL-4 表達(dá)水平的動態(tài)變化。
　　 （2）ELISA 法平行測定小鼠感染后第0d、4d，1w、2w、4w、8w、10w、12w 血清中抗體IgG、IgG1/IgG2a 的動態(tài)變化。
　　 （3）流式細(xì)胞術(shù)分析華支睪吸蟲感染小鼠感染后第0w，1w，4w，8w，12w T 淋巴細(xì)胞中CD4+CD25+T 細(xì)胞亞

4、群比例的動態(tài)變化。雙抗體夾心ELISA 法測定感染后不同時間點(diǎn)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中TGF-β表達(dá)的動態(tài)變化。
　　 結(jié)果:
　　 （1）脾臟細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-12 和IFN-γ的表達(dá)呈現(xiàn)大致相同的趨勢。
　　 與對照組相比較，自感染后第1~2w 開始上升至第4w 達(dá)到高峰開始下降，直到第12w 下降至與對照組相同水平。IL-4 的表達(dá)水平則自感染后第1w 開始持續(xù)上升，其上升趨勢一直持續(xù)至感染后第12w 實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)

5、束。其中，ESA 刺激組細(xì)胞因子的表達(dá)呈現(xiàn)出與ConA 刺激組相似的變化趨勢，未加刺激組未檢測出任何表達(dá)變化。
　　 （2）小鼠血清IgG 于感染后第2w 開始升高，約在第10w 達(dá)到高峰，此后有所下降但仍高于對照組，并維持至觀察結(jié)束的第12w；IgG1/IgG2a 比值感染后逐漸增高，并持續(xù)至第12w。
　　 （3）急性感染期CD4+CD25+ T 細(xì)胞的比例及其脾臟細(xì)胞培養(yǎng)上清中TGF-β的表達(dá)水平均無變化，直至感染