EAE小鼠模型的構(gòu)建以及NKT細胞和Th1-Th2細胞因子的作用研究.pdf

1、目的：多發(fā)性硬化(MS)是一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)脫髓鞘病變?yōu)樘攸c，遺傳易感個體與環(huán)境因素作用發(fā)生的自身免疫性疾病。由于多發(fā)性硬化的組織標本不易獲得，為了系統(tǒng)的研究MS的發(fā)病機制、病理改變，就需要建立一個穩(wěn)定可靠的多發(fā)性硬化動物模型。本實驗用髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白多肽誘導C57BL/6小鼠，嘗試建立多發(fā)性硬化的動物模型—實驗性自身免疫腦脊髓炎，并初步討NKT細胞和Th1/Th2細胞因子在其發(fā)病機制中的作用，為進一步開展對多發(fā)性硬化發(fā)病機制

2、和防治方法的研究奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：⑴用含結(jié)核分枝桿菌的完全弗氏佐劑加300ugMOG35-55抗原免疫C57BL/6小鼠，同時在第一次免疫(第0天)后立即和第2天給予腹腔注射0.1ml百日咳桿菌菌液，誘導C57BL/6小鼠的EAE模型。通過對小鼠體重，癥狀及中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理改變的觀察，評估EAE模型的建立情況。⑵應用SYBR熒光定量PCR技術(shù)檢測小鼠神經(jīng)組織(腦組織和脊髓組織)中干擾素-gamma(Interferon-γ

3、，IFN-γ)mRNA，白細胞介素-10(Interleukin-10，IL-10)mRNA的表達情況；應用流式細胞術(shù)直接熒光標記抗體(FITC-CD1d，PE-B7-H1，PE-B7-H2)檢測小鼠脾淋巴細胞膜上CD1d，B7-H1，B7-H2分子分別的表達情況。通過比較模型組與對照組的不同，初步探討NKT細胞和Th1/Th2細胞因子在EAE中的作用，為進一步開展對MS發(fā)病機制和防治方法的究奠定基礎(chǔ)。
　　 結(jié)果：①模型組的發(fā)

4、病率為65％，最高臨床癥狀神經(jīng)功能評分可達5分，且腦脊髓組織切片顯示血管周圍出現(xiàn)密集的袖套樣炎性細胞，浸潤的細胞類型以淋巴細胞為主，也可見少量膠質(zhì)細胞?；野踪|(zhì)均受累，腦白質(zhì)神經(jīng)纖維束問、腦膜和脊膜也發(fā)現(xiàn)炎性細胞浸潤。②實時熒光定量PCR結(jié)果顯示目的基因IFN-γ mRNA的表達量，與劉照組IFN-γACT值(12.70±0.16)相比，模型組下降為(10.89±0.52)，P＜0.05；IL-10mRNA表達量與對照組IL-10ACT值

5、(17.36±1.01)相比，模型組升高為(19.12±0.61)，P＜0.05。③流式細胞術(shù)結(jié)果顯示，與對照組小鼠脾細胞懸液中表達CD1d分子的細胞數(shù)量百分率均數(shù)(9.32±1.07)％相比，模型發(fā)病高峰期百分率均數(shù)為(2.09±0.26)％，而模型組緩解期小鼠脾細胞懸液中表達CD1d分子的細胞數(shù)量百分率為(13.8±1.93)％，各組之間的差別比較均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與對照組表達膜共刺激分子B7H1分子的細胞占脾淋巴細胞

6、百分率均數(shù)(55.01±3.12)％比較，發(fā)病組百分率均數(shù)為(68.23±4.84)％明顯升高(P＜0.05)。與對照組表達膜共刺激分子B7H2分子的細胞占脾淋巴細胞百分率均數(shù)(22.59±2.87)％比較，發(fā)病組百分率均數(shù)為(30.21±3.37)％也明顯增高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：⑴將MOG35-55與CFA完全乳化后，背部皮下免疫C57BL/6小鼠，外加腹腔注射百日咳菌液，成功的構(gòu)建了C57BL/6慢性復發(fā)-緩解型