阿奇霉素誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型的建立及其分子病理的研究.pdf

1、目的：建立阿奇霉素誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型并研究急性肝損傷過程中相關(guān)分子的動態(tài)變化，從而探討其作用的可能機制。
　　方法：取小鼠300只，每100只為一組，共分三組，每組中有90只給予0.3％阿奇霉素溶液200mg.kg-1、400mg.kg-1、800mg.kg-1腹腔注射，建立小鼠急性肝損傷模型，剩余10只為對照組，在注射阿奇霉素后0h、3h、6h、12h、24h、30h、36h、42h、48h和54h10個時間點取材，每個時

2、間點取10只小鼠，利用賴氏法檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）的活性變化；同時利用HE染色的方法檢測各時間點小鼠肝組織的病理變化；利用蛋白印跡的方法檢測各時間點小鼠肝組織中PCNA、Bcl-2、Bax、HSP70、HSP27、TNF-α、VEGF等分子的表達變化，用Gel Pro4.0軟件計算蛋白相對表

3、達值。
　　結(jié)果：與正常對照組小鼠相比較，200mg/kg阿奇霉素模型組小鼠血清ALT和AST活性變化不明顯；400mg/kg阿奇霉素模型組其ALT、AST活性于12h明顯升高，24h逐漸降低并于54h時恢復(fù)正常；800mg/kg阿奇霉素模型組其ALT、AST活性均呈顯著升高(P<0.05)，在24h可達高峰，于30h開始降低，54h時可恢復(fù)至正常。200、400mg/kg阿奇霉素注射后小鼠肝臟組織學(xué)變化不明顯；800mg/kg阿

4、奇霉素注射，肝受到一定損傷之后，小鼠的肝臟失去正常結(jié)構(gòu)，組織病理學(xué)結(jié)果顯示注射阿奇霉素后24h肝組織損傷最為嚴重，然后開始逐漸恢復(fù)，于54h可恢復(fù)至正常。阿奇霉素所誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷在3h，6h，12h，24h，30h，36h，42h，48h，54h之后肝PCNA、Bcl-2、Bax、HSP70、HSP27、TNF-α、VEGF蛋白的表達均可出現(xiàn)顯著的變化趨勢(P<0.05)。PCNA在阿奇霉素誘導(dǎo)后6h至30h明顯降低，36h時開始

5、升高，42h又有所下降，隨后又升高，54h又降低； Bcl-2在阿奇霉素誘導(dǎo)后明顯降低，在6h時達最低點，然后于30h開始升高，到36h和42h其表達又降低；Bax在阿奇霉素誘導(dǎo)后3h到6h逐漸升高，在12h達到高峰，然后降低，并逐漸向正常水平恢復(fù)。HSP27在阿奇霉素誘導(dǎo)后3h到6h開始升高，然后降低，在30h降至最低，隨后逐漸恢復(fù)至正常；HSP70在阿奇霉素誘導(dǎo)后3h至12h先升高，24h時降低，并逐漸恢復(fù)至正常; TNF-α在阿奇

6、霉素誘導(dǎo)后先逐漸升高，30h達到高峰，然后又逐漸降低， TNF-α致細胞膜的通透性增加，從而大量分泌，但因其高度的表達，可加重肝的損傷程度，因而后期又有逐漸降低趨勢；VEGF在阿奇霉素誘導(dǎo)后于24h逐漸升高，30h達最高，于36h開始下降，48h逐漸向正常水平恢復(fù)。
　　結(jié)論：⑴利用800mg/kg阿奇霉素注射小鼠成功建立小鼠急性肝損傷動物模型。⑵阿奇霉素誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷后肝組織PCNA、Bcl-2、Bax、HSP70、HSP2