肝母細(xì)胞瘤的分子病理學(xué)特點和臨床病理學(xué)意義的研究.pdf

1、背景：肝母細(xì)胞瘤(hepatoblastoma,HB)是一種少見的惡性腫瘤,人群中的發(fā)病率不足百萬分之一,但卻是兒童最常見的肝臟惡性腫瘤,占全部兒童惡性腫瘤的1％,占兒童肝臟惡性腫瘤的90％。由于發(fā)病率較低,研究較少,盡管有研究表明HB組織中存在一系列的基因變異,但HB的發(fā)生的分子機制還不是很明確。目前,國內(nèi)外較少有單中心大樣本HB臨床病理和分子病理特點的研究。我科從1984年1月1日-2013年12月31日,共診斷了本單位手術(shù)切除治療

2、的18歲以下HB患者50例,占我科肝臟惡性腫瘤的0.1％。本課題基于該50例HB,對其進行臨床病理特點、基因組微衛(wèi)星變異特征和microRNA-373(miR-373)差異表達特點的研究。
　　目的：⑴分析50例18歲以下HB患者臨床病理特點、主要臨床病理指標(biāo)及其對HB生物學(xué)行為的影響,探討其對預(yù)后評估的指導(dǎo)意義;⑵研究33例HB組織的10個基因組微衛(wèi)星標(biāo)志物變異特點與HB生物學(xué)行為的關(guān)系,選擇有價值的分子病理檢測標(biāo)志物,探討HB

3、基因組微衛(wèi)星變異的臨床和病理學(xué)意義;⑶檢測25例HB組織及配對肝組織差異表達特點,探討miR-373與HB生物學(xué)行為的關(guān)系,評估其可能的臨床和病理學(xué)意義。
　　方法：①取第二軍醫(yī)大學(xué)附屬東方肝膽外科醫(yī)院在1983年1月1日-2013年12月31日期間,手術(shù)切除的、病理診斷明確的、年齡小于18歲的HB病例共50例,收集患者的臨床參數(shù)及術(shù)后隨訪資料;回顧性分析病理診斷報告及并復(fù)習(xí)病理切片,收集患者的病理學(xué)參數(shù)及免疫組化結(jié)果,對50例H

4、B患者的各臨床病理學(xué)參數(shù)進行統(tǒng)計學(xué)分析;②采用顯微組織切割基礎(chǔ)上的PCR-SSCP檢測方法,選取33例HB組織和對應(yīng)瘤旁肝組織進行10個微衛(wèi)星位點不穩(wěn)定性(microsatellite instability, MSI)和雜合性缺失(loss of heterozygosity, LOH)檢測,對HB的臨床和病理特征與微衛(wèi)星MSI和LOH的相關(guān)性進行對比分析,以P<0.05為有差異的標(biāo)準(zhǔn);③采用熒光定量PCR法,檢測25例HB瘤組織和瘤

5、旁肝組織內(nèi)miR-373的差異表達情況,通過表達量的不同將HB分組,將HB的主要臨床病理參數(shù)與miR-373的差異表達分組進行相關(guān)性分析,以P<0.05為有差異的標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果：⑴50例HB患者中,男性36例,女性14例,男女比例為2.6:1,平均年齡43.56月(6月-210月);TNMⅡ期22例,Ⅲ期6例,Ⅳ期22例,男性患者較女性的分期更差(P=0.015);10例(100％)無包膜的病例均為男性,男性患者包膜形成率較低(

6、P=0.027);TNM為Ⅲ/Ⅳ期的患者血清AFP≥1000μg/L的比例(92.9％)顯著高于Ⅱ期的患者(59.1％)(P=0.004);有瘤栓形成患者的血清AFP≥1000μg/L的比例(100％)顯著高于無瘤栓患者(70％)(P=0.026);單純胎兒型HB血清AFP<1000μg/L的比例(33.3％)顯著高于其他類型HB(8.7％)(P=0.036);有衛(wèi)星灶的HB同時有瘤栓形成的比例(61.5％)顯著高于無衛(wèi)星灶的HB(13

7、.5％)(P=0.001);CK19免疫組化染色陽性的HB(57.1％)侵犯包膜的比例顯著高于陰性的HB(12％)(P=0.026);上皮間葉混合型HB直徑≥10cm的比例(100％)明顯高于其他類型的HB(50％)(P=0.009);位于肝左葉的HB上皮間葉混合型(75％)的比例明顯高于上皮型(26.2％)的HB(P=0.008);位于左葉的HB(82.4％)直徑大于10cm比例明顯高于肝右葉(45.5％)(P=0.012)。⑵在33

8、例HB中,10個位點的微衛(wèi)星LOH和MIS的發(fā)生率分別為66.67％(22/33)和54.55％(18/33),總微衛(wèi)星變異率為84.85％(28/33),每例HB微衛(wèi)星位點變異頻數(shù)為0-4個位點;在10個微衛(wèi)星檢測位點中,所有的微衛(wèi)星位點均有LOH或MIS發(fā)生,變異率范圍為3.03％-36.36％,總體變異率為16.67％,其中以D11S4680、D11S1363和D11S1363變異率較高,分別為36.36％、33.33％和27.2

9、7％。在發(fā)生微衛(wèi)星位點D11S1318、D11S4734、D11S1363、D11s4088變異的HB(77.8％),呈肝外生性生長的比例明顯高于未發(fā)生該位點微衛(wèi)星變異的HB(40％)(P=0.038);TNM為Ⅳ期的HB(100％),微衛(wèi)星LOH率明顯高于Ⅱ/Ⅲ期的HB(54.5％)(P=0.013)。⑶與瘤旁肝組織相比,25例HB組織中有7例miR-373表達上調(diào)超過2倍以上,平均miR-373表達水平高于瘤旁肝組織3.6倍,最高的

10、一例為36.43倍,8例下調(diào)低于2倍以上,HB組織miR-373的差異表達情況與瘤體直徑相關(guān),隨著表達量的增高,瘤體直徑有增大的趨勢(P=0.047)。⑷本組隨訪20例,存活14例(70％),平均生存時間22月,死亡6例(30％)。生存分析顯示血清AFP水平、瘤栓形成及腫瘤生長方式是術(shù)后總生存率的影響因素。
　　結(jié)論：①HB男性患者明顯多于女性,且男性患者、血清AFP≥1000μg/L、較高TNM分期、有瘤栓或衛(wèi)星灶形成、腫瘤生長

11、方式、CK19免疫組化染色陽性、上皮間葉混合型HB及腫瘤位于肝左葉等參數(shù)是HB的生物學(xué)行為及預(yù)后的相關(guān)因素。②微衛(wèi)星位點D11S1318、D11S4734、D11S1363變異發(fā)生率較高(27％-36％),可作為HB分子病理診斷檢測的一線標(biāo)志物,發(fā)生微衛(wèi)星位點D11S1318、D11S4734、D11S1363、D11s4088變異、腫瘤呈肝表面外生生長、高微衛(wèi)星LOH發(fā)生率等也可能提示腫瘤具有較強的侵襲能力。③miR-373在HB組織