豬瘟DNA疫苗的免疫病理學(xué)和分子病理學(xué)評(píng)價(jià).pdf

1、豬瘟 (Classic Swine Fever,CSF) 是由豬瘟病毒 (Classic Swine Fever virus,CSFV) 引起的一種豬的高度接觸性傳染疾病,被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織 (Office International des Epizooties,OIE) 列為A類傳染病之一.目前,免疫預(yù)防接種仍然是控制和根除CSF的主要手段,因此研制和正確使用安全有效疫苗仍是CSF綜合防治中的中心環(huán)節(jié).使用傳統(tǒng)疫苗例如C-株免疫的豬

2、群,在流行病學(xué)調(diào)查和CSF防制工作中,不能用血清學(xué)方法來區(qū)分自然感染豬群和免疫接種豬群,因此,迫切需要像DNA疫苗一類的標(biāo)記疫苗來對(duì)CSF進(jìn)行有效合理的控制. 在前面的研究中,對(duì)基于RNA復(fù)制子表達(dá)載體的CSF DNA疫苗pSFV1CS-E2的免疫效果進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)免疫豬后能產(chǎn)生CSFV的特異性的中和抗體并能抵抗強(qiáng)毒的攻擊.為了進(jìn)一步明確pSFV1CS-E2的保護(hù)作用,用較低劑量的pSFV1CS-E2、較少免疫次數(shù)免疫豬,再用CSFV

3、石門株進(jìn)行攻毒,其間觀察臨床癥狀,剖殺后觀察病理解剖學(xué)變化,并取各器官用4﹪多聚甲醛固定,常規(guī)制作石蠟切片,蘇木精-伊紅 (hematoxylin and eosin,HE) 染色,進(jìn)行組織病理學(xué)觀察.制作簡(jiǎn)易的手工石蠟組織芯片,用免疫組織化學(xué) (immunohistochemistry,IHC)、原位雜交組織化學(xué) (in situ hybridization histochemistry,ISHH) 及原位逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (in

4、 situ reversetranscription polymerase chain reaction,ISRT-PCR) 等分子病理學(xué)方法檢測(cè)各器官中CSFV的分布及載量,同時(shí)對(duì)三種檢測(cè)方法的敏感性進(jìn)行了比較，另外還建立了一種對(duì)石蠟包埋標(biāo)本中的CSFVRNA進(jìn)行擴(kuò)增的套式RF-PCR方法,用此方法對(duì)CSFV在各個(gè)器官中的分布進(jìn)行了符合檢測(cè). 臨床、病理解剖及組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)免疫攻毒組豬只的臨床表現(xiàn)正常、病理學(xué)變化較輕或者無

5、變化,大部分豬只的免疫器官中淋巴細(xì)胞和淋巴濾泡的數(shù)量增加,生發(fā)中心體積增大,漿細(xì)胞數(shù)量增加;脾臟和淋巴結(jié)中的胸腺依賴區(qū)的淋巴細(xì)胞的增多;空質(zhì)粒攻毒對(duì)照組則出現(xiàn)典型的病癥甚至死亡. 分子病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，免疫攻毒組與空質(zhì)粒攻毒對(duì)照組相比CSFV抗原和基因檢出率低，分布的范圍較小,三種不同的檢測(cè)方法的敏感性存在差異,以ISRT-PCR方法最敏感,其次是ISHH,最后是IHC.套式RT-PCR技術(shù)檢測(cè)石蠟包埋組織中的病毒RNA，檢測(cè)

6、結(jié)果與其它檢測(cè)方法相符合,免疫攻毒組的檢出率明顯的低于攻毒對(duì)照組. 研究結(jié)果表明，pSFV1CS-E2可以提高機(jī)體的免疫反應(yīng),抑制CSFV在豬體內(nèi)增殖,保護(hù)CSFV對(duì)組織器官免受病理性損傷,對(duì)CSFV強(qiáng)毒攻擊有一定的抵抗作用.ISRT-PCR,ISHH,IHC等分子病理學(xué)方法在敏感性上雖然存在一定差異,但均可以作為評(píng)價(jià)CSF疫苗免疫效果和研究CSFV致病機(jī)制的有效手段.建立的檢測(cè)石蠟包埋組織中CSFV RNA的套式RT-PCR方