環(huán)孢素所致小鼠急性肝損傷模型的建立及保肝解毒顆粒對其干預作用的研究.pdf

1、[目的]探索應用環(huán)孢素建立小鼠急性肝損傷模型的相對合適劑量及時間，并探討環(huán)孢素所致小鼠急性肝損傷的發(fā)病機理及保肝解毒顆粒對其的干預機制。 [方法](1)昆明種小鼠50只，隨機分為正常、低倍、中倍、高倍劑量造模組和空白對照組5組，每組10只。造模各組分別以環(huán)孢素0.054g/kg，0.270g/kg，0.540g/kg，0.8l0g/kg的劑量灌胃1次。檢測血清ALT、AST，并做肝組織病理形態(tài)學觀察。(2)昆明種小鼠90只，隨機

2、分為空白對照1組，模型組、甘利欣對照組各4組，分別于造模后18、36、54、72小時處死。陽性對照組造模前連續(xù)5天以甘利欣75mg/kg的混懸液按0.2ml/10g劑量灌胃，模型組和空白對照組給以同劑量的蒸溜水灌胃，最后一次灌胃后禁食12小時，模型組、陽性對照組以環(huán)孢素540mg/kg劑量灌胃1次。處死前分別禁食(不禁水)16小時。空白對照組給以等體積的生理鹽水灌胃。檢測血清ALT，并做肝組織病理形態(tài)學觀察。(3)昆明種小鼠60只，隨機

3、分為模型組，保肝解毒顆粒大、中、小劑量組，甘利欣對照組和空白對照組。造模前連續(xù)5天大、中、小劑量組、陽性對照組分別以保肝解毒顆粒21.6g/kg，10.8g/kg，5.4g/kg、甘利欣75mg/kg灌胃。除空白組外，各組以環(huán)孢素540mg/kg劑量灌胃1次。分別檢測血清ALT、AST、SOD、MDA、GSH-PX、IL-18，觀察肝組織普通病理形態(tài)學和電鏡下肝細胞超微結構變化，并應用TUNEL法檢測肝細胞凋亡。 [結果](1)

4、應用環(huán)孢素灌胃后，小鼠在540mg/kg劑量出現ALT、AST明顯升高，與空白組比較有顯著意義(P＜0.05)，肝細胞病變以濁腫為主，肝竇部分消失。(2)應用540mg/kg劑量的環(huán)孢素灌胃時，小鼠在18小時出現ALT明顯升高，與空白組比較有顯著意義(P＜0.05)，肝細胞出現明顯的損傷病理改變。36、54、72小時組小鼠ALT繼續(xù)升高，肝細胞損傷病理改變嚴重，死亡率逐漸提高。(3)模型組小鼠血清ALT、AST、MDA水平明顯升高，SO

5、D和GSH-PX水平明顯降低(P＜0.05)。各劑量保肝解毒顆粒及甘利欣均可有效降低小鼠血清ALT、AST、MDA水平，顯著提高SOD和GSH-PX水平，與模型組比較均有顯著的統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(4)環(huán)孢素可使小鼠血清IL-18水平顯著降低，與空白組比較有顯著的統(tǒng)計學意義(＜0.05)。各劑量保肝解毒顆粒及甘利欣在提高小鼠血清IL-18水平方面與模型組比較均無顯著的統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。(5)環(huán)孢素模型組小鼠肝細胞變性程

6、度嚴重，保肝解毒顆粒各劑量及甘利欣組小鼠肝細胞變性程度均有所改善，其中尤以大、中劑量組和甘利欣組效果最佳。(6)環(huán)孢素能夠誘導小鼠肝細胞發(fā)生凋亡，保肝解毒各劑量組均可使環(huán)孢素所致DILI小鼠肝細胞凋亡程度有所減輕，其中尤以大、中劑量效佳。(7)模型組小鼠肝細胞內可見大量脂滴；線粒體有的較豐富，有的明顯減少，線粒體嵴部分變短或消失，嵴間腔擴大，內質網有水腫現象和核糖體脫離現象，呈囊泡狀或囊?guī)睿桓郀柣w呈囊泡狀或囊?guī)?；細胞核常染色質增多

7、，異染色質減少。保肝解毒顆粒各劑量和甘利欣組均可使肝細胞超微結構得到不同程度的恢復，尤以大、中劑量組效果最佳。 [結論]應用環(huán)孢素灌胃造成小鼠急性肝損傷的相對合適劑量為540mg/kg，相對合適時間為18小時。環(huán)孢素對肝細胞造成損傷的主要病理變化為肝細胞脂肪變性，還可影響肝細胞的能量及蛋白代謝。環(huán)孢素致小鼠急性肝損傷發(fā)生機理與自由基脂質過氧化反應和細胞凋亡關系密切。 濕熱毒蘊、肝脾不和是DILI的基本病機，清熱除濕解毒、

8、調肝健脾和胃是治療DILI的根本大法。保肝解毒顆粒具有清熱燥濕、涼肝解毒、疏肝理氣、健脾和胃之功效，是防治DILI行之有效的中藥制劑。 保肝解毒顆?？捎行Ы档铜h(huán)孢素致DILI小鼠血清ALT、AST、MDA水平，顯著升高SOD和GSH-PX水平，不同程度地使肝細胞損傷、凋亡和肝細胞超微結構變化得到改善。保肝解毒顆粒對抗急性DILI的作用機理主要與其抗脂質過氧化反應、免疫調節(jié)和抑制肝細胞凋亡等有關，而與肝細胞核酸代謝影響關系不大。