3種植物病毒抑制劑的藥效評(píng)價(jià)及對(duì)PVX變異影響研究.pdf

1、農(nóng)作物病毒病害是僅次于真菌病害的第二大類(lèi)病害，對(duì)其防治非常困難。藥劑防治是植物病毒病防治的一個(gè)重要方面，不同種藥劑對(duì)不同植物病毒的作用機(jī)理和防治效果不盡相同，甚至同種藥劑在不同地區(qū)氣候條件下效果都會(huì)有差異。因此需要在大面積推廣之前進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)。在大田試驗(yàn)中測(cè)定藥劑的抗病毒效果，工作量大，而實(shí)驗(yàn)室中傳統(tǒng)的半葉枯斑法需要接種到病毒枯斑寄主，耗時(shí)長(zhǎng)，能否在實(shí)驗(yàn)室中探索一種藥劑藥效的快速評(píng)價(jià)方法呢？這一問(wèn)題值得進(jìn)行探索。另外，植物病毒在自然

2、界存在著頻繁的變異，長(zhǎng)期使用同種藥劑能否引起病毒變異，來(lái)逃避或抵御病毒抑制劑的脅迫。本文對(duì)上述問(wèn)題做了初步探索研究。
　　在中國(guó)煙草公司推薦使用的植物病毒抑制劑中選取0.5％氨基寡糖水劑、24％混脂·硫酸銅水劑、20％嗎啉胍·乙酸銅可濕性粉劑3種藥劑在湖南郴州煙區(qū)進(jìn)行藥劑的預(yù)防效果和治療效果分析。結(jié)果顯示，0.5％氨基寡糖水劑、24％混脂·硫酸銅水劑對(duì)煙草花葉病平均預(yù)防效果分別為81.12％、81.13％，平均治療效果分別為62.

3、08％、71.74％。而20％嗎啉胍·乙酸銅在該地區(qū)對(duì)煙草花葉病的防治效果較差，平均預(yù)防效果為56.14％，而平均治療效果只有19.66％。因此建議前2種藥劑在該地區(qū)大田生產(chǎn)中輪換使用。
　　為了能快速篩選和評(píng)價(jià)植物病毒抑制劑對(duì)病毒的效果，我們利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的PVX-GFP侵染性克隆侵染云煙，并用抗病毒藥劑0.5％氨基寡糖水劑處理注射葉片，2d后利用UV燈照射觀察PVX-GFP在葉片中的移動(dòng)情況，拍照記錄測(cè)量并統(tǒng)計(jì)熒光斑的大小，并

4、利用摩擦接種法觀察對(duì)比。結(jié)果表明，藥劑處理后葉片中熒光斑擴(kuò)散速率小于清水對(duì)照葉片，為初步建立藥劑藥效的快速評(píng)價(jià)體系提供思路。
　　香菇多糖及毒氟磷是防治植物病毒病的高效藥劑，前者能夠?qū)Σ《镜脑鲋尺^(guò)程產(chǎn)生抑制作用，阻止病毒的復(fù)制，后者可以提高植物本身抗性從而抑制病毒擴(kuò)散。我們汁液摩擦接種法將PVX接種到健康煙草中，并利用上述兩種藥劑分別連續(xù)8個(gè)月8次處理侵染后的感病煙苗，設(shè)計(jì)PVX的RdRp及CP區(qū)域引物，用RT-PCR法將第3、5

5、、8次處理后病毒的復(fù)制酶及外殼蛋白區(qū)域基因克隆測(cè)序，與初始序列比對(duì)變異情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種藥劑脅迫后的CP序列與對(duì)照相比，未見(jiàn)氨基酸變異。而藥劑脅迫后的復(fù)制酶區(qū)域均出現(xiàn)一個(gè)氨基酸變異，但變異位點(diǎn)不同。
　　本研究為郴州煙區(qū)篩選出了對(duì)煙草花葉病防治效果較好的植物病毒抑制劑，0.5％氨基寡糖素和24％混脂·硫酸銅。并且在實(shí)驗(yàn)室中初步建立了一個(gè)植物病毒抑制劑的快速評(píng)價(jià)體系，為快速篩選和評(píng)價(jià)植物病毒抑制劑提供了一種新的思路。利用香菇多糖及毒