HDAC抑制劑對腺病毒載體介導(dǎo)的體外抗原呈遞的影響.pdf

1、在分子生物學(xué)領(lǐng)域,腺病毒載體是將外源基因?qū)雱游锛?xì)胞內(nèi)經(jīng)常使用的載體之一。由于其靶細(xì)胞種類多,對增殖期及靜止期細(xì)胞均有很高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,易于分離純化,可容納較大的目的基因片段,理化性質(zhì)較穩(wěn)定,不整合到宿主基因組中,不會引起插入突變,因而被廣泛用于基因治療、體外基因轉(zhuǎn)染及基因疫苗制備等實(shí)驗(yàn)及臨床研究中。在現(xiàn)代生物學(xué)研究中,主要通過體外免疫法制備單克隆抗體,其較體內(nèi)免疫法有明顯的優(yōu)勢。單抗導(dǎo)向療法雖在臨床中取得了一定治療效果,但其存在的問題也

2、限制了其臨床應(yīng)用和療效提高。近年來,關(guān)于體外免疫,抗原呈遞、T細(xì)胞受體、B細(xì)胞活化、細(xì)胞因子等方面的研究都取得了一定進(jìn)展。本論文主要通過研究腺病毒介導(dǎo)的體外免疫方法,采用腺病毒介導(dǎo)樹突狀細(xì)胞抗原呈遞,再經(jīng)多肽刺激后,利用流式絀胞術(shù),通過檢測T淋巴細(xì)胞IFN-γ的分泌,進(jìn)而研究加入HDAC抑制劑對腺病毒載體介導(dǎo)的體外抗原呈遞的影響。
　　 目的:
　　 探討腺病毒介導(dǎo)的體外免疫方法,通過腺病毒介導(dǎo)樹突狀細(xì)胞抗原呈遞,利用流

3、式細(xì)胞術(shù),通過檢測T淋巴細(xì)胞IFN-γ的分泌,研究HDAC抑制劑對腺病毒載體介導(dǎo)的體外抗原呈遞的影響。
　　 方法：
　　 1.腺病毒介導(dǎo)的樹突狀細(xì)胞抗原呈遞通過建立小鼠骨髓源樹突狀細(xì)胞體外培養(yǎng)方法,在此基礎(chǔ)上用攜帶綠色熒光蛋白(GFP)報告基因的腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)樹突狀細(xì)胞(DC),通過熒光倒置顯微鏡觀察熒光表達(dá),并經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測GFP平均熒光強(qiáng)度表達(dá)以檢測腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。穿刺法制備小鼠脾單細(xì)胞懸液,腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)樹突狀細(xì)胞與脾

4、細(xì)胞以1:10比例進(jìn)行混合細(xì)胞培養(yǎng)三天后,經(jīng)多肽(HYLSTQSAL)刺激通過流式細(xì)胞儀檢測T淋巴細(xì)胞IFN-γ的分泌。
　　 2.HDAC抑制劑作用于腺病毒載體介導(dǎo)的體外抗原呈遞通過加入HDAC抑制劑(TSA)作用于腺病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)樹突狀細(xì)胞,經(jīng)熒光倒置顯微鏡觀察熒光強(qiáng)度表達(dá)改變,并通過流式細(xì)胞儀檢測GFP熒光強(qiáng)度表達(dá)的改變。穿刺法制備小鼠脾單細(xì)胞懸液,TSA(±)腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)樹突狀細(xì)胞與脾細(xì)胞以1:10比例進(jìn)行混合細(xì)胞培養(yǎng)三天后

5、,經(jīng)多肽(HYLSTQSAL)刺激通過流式細(xì)胞儀檢測TSA(±)兩組細(xì)胞T淋巴細(xì)胞IFN-γ的分泌的改變。
　　 結(jié)果：
　　 1.經(jīng)多肽(HYLSTQSAL)刺激后流式細(xì)胞儀可檢測到T淋巴細(xì)胞IFN-γ的分泌。
　　 2.加入HDAC抑制劑(TSA)作用后,樹突狀細(xì)胞表達(dá)的GFP熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng),經(jīng)多肽(HYLSTQSAL)刺激后通過流式細(xì)胞儀檢測TSA(±)兩組細(xì)胞T淋巴細(xì)胞IFN-γ的分泌沒有顯著性差異。<