腺病毒載體對大鼠移植靜脈影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文擬行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討腺病毒載體轉(zhuǎn)染后的對移植靜脈的影響。 研究方法： 選用wistar大鼠162只，隨機(jī)分成三組，每組54只，實(shí)驗(yàn)組(手術(shù)，腺病毒處理移植血管)，對照組(手術(shù))，正常對照組(非手術(shù))，手術(shù)組按時(shí)間再分成術(shù)后3天、10天、30天組。模擬臨床上自體靜脈移植術(shù)，通過問置移植wistar大鼠頸靜脈的分支頭靜脈于同側(cè)頸總動(dòng)脈，實(shí)驗(yàn)組應(yīng)用腺病毒液浸泡20分鐘后間置移植。術(shù)后移植靜脈行HE染色和Verhoeff-Van

2、Gieson染色，用計(jì)算機(jī)圖象分析儀觀察血管內(nèi)膜，測量平均厚度。應(yīng)用SABC法增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)免疫組織化學(xué)染色，觀察血管內(nèi)膜平滑肌細(xì)胞內(nèi)PCNA表達(dá)及血管平滑肌細(xì)胞增殖的情況。標(biāo)本先給予微波抗原修復(fù)，PCNA染色，定位于細(xì)胞核內(nèi)，陽性細(xì)胞核染色為棕褐、棕黃、淺黃色。以陽性細(xì)胞為分子計(jì)算PCNA表達(dá)指數(shù)并用百分比表示。取材的血管于倒置熒光顯微鏡，以紫外光激發(fā)觀察測定腺病毒載體(AdS-GFP)轉(zhuǎn)染率。半定量逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(

3、RT-PCR)及Western蛋白印跡檢測ICAM-1、VCAM-1水平。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，均以P<0.05為有顯著性差異。 研究結(jié)果： 1、腺病毒載體(Ad5-GFP)轉(zhuǎn)染率的測定結(jié)果：術(shù)后3天，GFP表達(dá)較高，26.4±3.6％；術(shù)后10天，GFP表達(dá)有所下降，14.5±2.1％；術(shù)后30天，GFP幾乎沒有表達(dá)，0.81±0.2％。 2、移植術(shù)后10天實(shí)驗(yàn)組及對照組可見明顯內(nèi)膜增生。移

4、植術(shù)后30天實(shí)驗(yàn)組及對照組內(nèi)膜增生減輕。實(shí)驗(yàn)組及對照組與正常非移植靜脈相比，內(nèi)膜增生明顯(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)組較對照組內(nèi)膜增生稍明顯，但統(tǒng)計(jì)學(xué)無差異。 3、實(shí)驗(yàn)中正常靜脈平滑肌細(xì)胞PCNA陽性細(xì)胞極少，對照組與實(shí)驗(yàn)組術(shù)后10天，內(nèi)膜與中膜SMC的PCNA陽性細(xì)胞增多，增殖達(dá)到高峰。術(shù)后30天中膜SMC的PCNA陽性細(xì)胞明顯減少。實(shí)驗(yàn)組及對照組與正常非移植靜脈相比，PCNA陽性細(xì)胞增高明顯(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組較對照組PCNA

5、陽性細(xì)胞稍多，但統(tǒng)計(jì)學(xué)無差異。 4、RT-PCR和Westemblot結(jié)果正常靜脈ICAM-1 mRNA、VCAM-1mRNA和蛋白表達(dá)很少，對照組移植后3天部分細(xì)胞即出現(xiàn)陽性表達(dá)，10天表達(dá)最強(qiáng)，30天仍較高。與正常靜脈組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組較對照組表達(dá)更高，但與對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 研究結(jié)論： 1、腺病毒載體能高效的進(jìn)行體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移，作用時(shí)間短暫。腺病毒載體導(dǎo)致移植靜脈的血管內(nèi)SMC活化、增多