沉默抑制信號(hào)B7-H1對(duì)樹(shù)突細(xì)胞抗原呈遞功能的影響.pdf

1、樹(shù)突細(xì)胞(DCs)是免疫系統(tǒng)中最重要的專職抗原呈遞細(xì)胞，在外周捕獲抗原后，經(jīng)過(guò)處理形成MHC：抗原肽復(fù)合物并表達(dá)于細(xì)胞表面。同時(shí)，上調(diào)CD40，CD80，CD86等共刺激分子的表達(dá)，為T(mén)細(xì)胞的激活提供協(xié)同刺激信號(hào)。由于其在激活免疫反應(yīng)中的重要作用，樹(shù)突細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于抗腫瘤免疫治療中。但是，在荷瘤宿主體內(nèi)，腫瘤微環(huán)境及腫瘤對(duì)樹(shù)突細(xì)胞免疫耐受的誘導(dǎo)導(dǎo)致腫瘤免疫治療臨床效果不理想。所以，打破免疫耐受在抗腫瘤免疫治療中具有重要意義。許多腫瘤都

2、可以誘導(dǎo)樹(shù)突細(xì)胞耐受，如誘導(dǎo)樹(shù)突細(xì)胞表面抑制性分子B7-H1表達(dá)增加從而使機(jī)體免疫功能受到抑制。因此，我們假設(shè)通過(guò)siRNA技術(shù)沉默樹(shù)突細(xì)胞B7-H1后能夠提高以樹(shù)突細(xì)胞為基礎(chǔ)的抗腫瘤免疫治療的效果。 第一部分：腫瘤及腫瘤相關(guān)因素影響樹(shù)突細(xì)胞B7-H1的表達(dá)首先通過(guò)卵巢癌腫瘤細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞上清液與骨髓來(lái)源樹(shù)突細(xì)胞共培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)確定了腫瘤及腫瘤相關(guān)因素誘導(dǎo)樹(shù)突細(xì)胞免疫抑制分子表達(dá)的情況。通過(guò)半定量RT-PCR從轉(zhuǎn)錄水平及流式細(xì)胞儀從

3、蛋白表達(dá)水平觀察了腫瘤細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞相關(guān)因素對(duì)骨髓來(lái)源的樹(shù)突細(xì)胞表面B7-H1表達(dá)的影響。結(jié)果表明，腫瘤細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞相關(guān)因素能夠明顯上調(diào)樹(shù)突細(xì)胞B7-H1的表達(dá)。 第二部分：化學(xué)合成B7-H1siRNA沉默效果的研究利用化學(xué)合成的B7-H1siRNA轉(zhuǎn)染骨髓來(lái)源的樹(shù)突細(xì)胞，再通過(guò)半定量RT-PCR及流式細(xì)胞儀分別從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平研究B7-H1siRNA對(duì)樹(shù)突細(xì)胞B7-H1表達(dá)的沉默效果。結(jié)果顯示利用化學(xué)合成的B7-H1si

4、RNA可以有效沉默樹(shù)突細(xì)胞B7-H1的表達(dá)。 第三部分：沉默B7-H1的樹(shù)突細(xì)胞負(fù)載腫瘤特異性抗原肽(TRP2)后在抗腫瘤免疫治療中的作用實(shí)驗(yàn)首先建立了以黑色素瘤為基礎(chǔ)的腫瘤免疫治療小鼠模型。然后利用B7-H1沉默的樹(shù)突細(xì)胞負(fù)載TRP2抗原肽免疫小鼠，觀察沉默B7-H1的樹(shù)突細(xì)胞的抗腫瘤免疫效應(yīng)。并通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)小鼠脾臟內(nèi)Gr1<'+>CD11b<'+>細(xì)胞和Treg細(xì)胞(T調(diào)節(jié)細(xì)胞)的變化情況來(lái)研究免疫抑制的機(jī)制。結(jié)果顯示

5、以。B7-H1沉默的樹(shù)突細(xì)胞為基礎(chǔ)的腫瘤免疫治療能夠有效抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，并且導(dǎo)致宿主體內(nèi)Gr1<'+>CD11b<'+>細(xì)胞和Treg細(xì)胞的減少。綜上，我們得出：1)1D8卵巢癌細(xì)胞能夠上調(diào)樹(shù)突細(xì)胞B7-H1的表達(dá)；2)化學(xué)合成的B7-H1siRNA能夠有效降低B7-H1mRNA水平和細(xì)胞表面：B7-H1的表達(dá)水平；3)沉默樹(shù)突細(xì)胞B7-H1能夠明顯提高以樹(shù)突細(xì)胞為基礎(chǔ)的抗腫瘤免疫治療的療效；4)實(shí)驗(yàn)組中Gr1<'+>CD11b<'

6、+>髓系抑制細(xì)胞及CD4<'+>CD25<'+>Treg細(xì)胞的減少，表明荷瘤宿主體內(nèi)Gr1<'+>CD11b<'+>髓系抑制細(xì)胞和CD4<'+>CD25<'+>Treg細(xì)胞的產(chǎn)生依賴于B7-H1的信號(hào)傳遞途徑。所以，B7-H1導(dǎo)致的免疫抑制可能在腫瘤進(jìn)展和腫瘤引起的樹(shù)突細(xì)胞耐受中起重要作用。 通過(guò)siRNA技術(shù)沉默樹(shù)突細(xì)胞B7-H1的表達(dá)能夠降低免疫抑制水平并且控制腫瘤的生長(zhǎng)。雖然只在動(dòng)物模型和黑色素細(xì)胞瘤模型中取得了初步效果，