嚴(yán)重創(chuàng)傷對細(xì)胞免疫和樹突狀細(xì)胞抗原提呈功能的影響.pdf

1、目的：研究嚴(yán)重創(chuàng)傷對機(jī)體細(xì)胞免疫和DC的影響，以此闡明嚴(yán)重創(chuàng)傷后，細(xì)胞免疫功能的變化，DC抗原提呈和過繼性轉(zhuǎn)移免疫應(yīng)答能力的變化和DC數(shù)量、種類、表型及分泌細(xì)胞因子功能變化的關(guān)系及其意義，并在此基礎(chǔ)上初步探索促進(jìn)創(chuàng)傷恢復(fù)的一些新措施。 方法：采用小鼠定量失血合并雙股骨骨折的創(chuàng)傷模型，在不同時(shí)間分別用2,4-二硝基氟苯（DNFB）或異硫氰酸熒光素（FITC）致敏，導(dǎo)致遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH）。用流式細(xì)胞儀檢測FITC致敏后的腹股溝

2、淋巴結(jié)細(xì)胞中的FITC陽性細(xì)胞及其表面分子CD11c和MHC II。在DNFB致敏的早期和晚期，將致敏小鼠的腹股溝淋巴結(jié)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至正常小鼠，并測定該正常小鼠的DTH反應(yīng)。用14 ％ Nycodenz密度梯度離心法分離純化脾樹突狀細(xì)胞，采用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)，檢測脾非黏附細(xì)胞在脾DC刺激下的增殖情況以及1-甲基色氨酸（1-methyl tryptophan, 1-MT）對這種增殖的影響。ELISA方法檢測脾DC在體外抗原提呈過程中

3、以及脾DC與內(nèi)毒素在體外共培養(yǎng)不同時(shí)間的過程中細(xì)胞因子IL-10和IL-12的含量。并用流式細(xì)胞儀檢測脾、胸腺、腹股溝淋巴結(jié)和腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞表面分子CD11c、MHC II、CD40、CD80和CD86的表達(dá)。 結(jié)果：創(chuàng)傷后小鼠的DTH反應(yīng)下降，傷后24 h時(shí)下降到最低點(diǎn)，24 h后DTH反應(yīng)開始回升，傷后7接近正常水平；流式細(xì)胞分析表明，創(chuàng)傷小鼠的腹股溝淋巴結(jié)中的FITC陽性細(xì)胞，F(xiàn)ITC和CD11c雙陽性細(xì)胞（攜帶FITC

4、的DC）以及FITC、CD11c和MHCII三陽性細(xì)胞（攜帶FITC的成熟DC）的含量都比正常小鼠大幅度降低。在早期（致敏后1天）的細(xì)胞轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)中，接受創(chuàng)傷后24小時(shí)小鼠淋巴結(jié)細(xì)胞的小鼠的DTH反應(yīng)顯著降低，接受正常和創(chuàng)傷小鼠等量混合的淋巴結(jié)細(xì)胞（其總數(shù)量為未混合細(xì)胞的2倍）的小鼠的耳腫程度顯著提高（P<0.01）；在晚期（致敏后5天）的細(xì)胞轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)中，雖然接受混合淋巴結(jié)細(xì)胞的小鼠的耳腫程度顯著高于接受創(chuàng)傷后24小時(shí)小鼠淋巴結(jié)細(xì)胞的小鼠

5、，但是兩者均顯著低于接受正常小鼠淋巴結(jié)細(xì)胞的小鼠（P<0.01）。正常小鼠脾非黏附細(xì)胞的增殖指數(shù)（PI）明顯高于創(chuàng)傷組小鼠，此外，在抗原提呈過程中，1-MT對脾DC刺激脾非黏附細(xì)胞的增殖也有一定的影響。創(chuàng)傷小鼠脾DC在抗原提呈過程中分泌的IL-12比正常小鼠明顯降低（P<0.05），IL-10則無明顯差別；而脾DC與內(nèi)毒素共培養(yǎng)過程中，創(chuàng)傷小鼠脾DC分泌的IL-12比正常小鼠明顯升高（P<0.05），IL-10則明顯降低；創(chuàng)傷24 h后

6、，脾成熟DC比正常組顯著減少（P<0.05），未成熟DC則顯著增多（P<0.05）；腹股溝淋巴結(jié)DC總數(shù)量，成熟DC和未成熟DC的數(shù)量比正常組均顯著降低（P<0.01）；腸系膜淋巴結(jié)DC總數(shù)量，成熟DC和未成熟DC的數(shù)量也都比正常組顯著下降（P<0.01）。 結(jié)論： （1）建立了小鼠嚴(yán)重創(chuàng)傷模型，體內(nèi)外的實(shí)驗(yàn)證明嚴(yán)重創(chuàng)傷會導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞免疫功能下降 （2）細(xì)胞免疫功能的下降與DC數(shù)量、成熟狀態(tài)和表型及DC抗原提呈和