間日瘧原蟲紅內期抗原和瘧色素對樹突狀細胞免疫功能的影響.pdf

1、目的：（1）觀察間日瘧原蟲可溶性抗原（Plasmodium vivax, P.vAg）、間日瘧原蟲瘧色素（hemozoin, HZ)對樹突狀細胞（dendritic cell, DC）成熟性分化和功能的影響；（2）探討P.v Ag和HZ在通過TLR2（TollLike Receptors2）活化DC中的作用。
　　方法：（1）用間日瘧原蟲感染紅細胞(iRBC)制備P.vAg和純化HZ；（2）用健康人外周血分離單核細胞，并在細胞因子

2、GM-CSF、IL-4的作用下獲得未成熟DC（immature DC, imDC）；（3）用不同劑量P.vAg（0.1μg/ml、1.0μg/ml、10.0μg/ml）和HZ（0.1μmol/L、1.0μmol/L、10.0μmol/L）分別誘導imDC繼續(xù)分化，以及imDC經(jīng)P.v Ag、HZ作用后，繼續(xù)用LPS刺激，采用流式細胞術分析不同處理的DC表面成熟相關性分子CD83、CD86、HLA-DR的變化；（4）上述不同劑量的P.vA

3、g、HZ誘導后的DC與自體淋巴細胞（Self LC）共培養(yǎng)（1：20）3天，用流式細胞術分析淋巴細胞增殖水平（CFSE標記法）及分泌IFN-γ的T細胞的比率；（5）上述不同劑量的P.vAg、HZ作用DC4h后，用RT-PCR法檢測DC的TLR2 mRNA的表達水平。
　　結果：（1）外周血單核細胞能在GM-CSF、IL-4誘導下分化為imDC，細胞具典型的DC特征性形態(tài)，高表達CD11c,低表達CD14；LPS能夠誘導DC成熟，其

4、表面成熟性分子CD83、CD86、HLA-DR的表達均增加；（2）P.vAg、HZ誘導的DC表面成熟性分子的表達：P.vAg組的DC表面成熟性分子有部分增加，其中P.vAg0.1μg/ml、1.0μg/ml、10.0μg/ml組的CD83均明顯升高（p<0.05，p<0.01，p<0.01），而HZ作用的DC表面分子則有不同程度的下降，其中 HZ1.0μmol/L組 CD86明顯降低（p<0.05），HZ1.0μmol/L、10.0μm

5、ol/L組HLA-DR的表達明顯降低（p<0.05，p<0.01），且HZ高劑量（1.0μmol/L和10.0μmol/L）組HLA-DR表達量明顯低于HZ低劑量（0.1ug/ml）組（p<0.05）；（3）經(jīng)P.vAg和HZ作用的DC再經(jīng)LPS誘導后，其表面成熟性分子CD83、CD86、HLA-DR的表達變化：各處理組與未誘導對照組（DC alone）相比，P.vAg各劑量組CD83、 CD86表達量明顯升高（p<0.01或p<0.0

6、5）， P.vAg10.0μg/ml組HLA-DR表達量明顯升高（p<0.05）；HZ各劑量組CD83明顯升高（p<0.01或 p<0.05），HZ0.1μmol/L和1.0μmol/L劑量組CD86和HLA-DR明顯升高（p<0.01或p<0.05），而HZ高劑量（10.0μmol/L）組對DC三種成熟表型分子的表達均呈現(xiàn)一定的抑制。HZ各處理組與LPS誘導組相比， HZ10.0μmol/L劑量組CD83和HLA-DR的表達量均顯著低

7、下（p<0.05，p<0.01），并且HZ10.0μmol/L劑量組CD86、HLA-DR表達均較HZ0.1μmol/L、1.0μmol/L組明顯下降（p<0.01或p<0.05）；（4）負載P.vAg的DC與Self LC共培養(yǎng)，分泌IFN-γ的T淋巴細胞比率較未誘導組升高，其中P.vAg1.0μg/ml、10.0μg/ml組有統(tǒng)計學意義（p<0.01）。負載HZ各劑量組中分泌 IFN-γ的T淋巴細胞比率較未誘導組無明顯差別；同時相對

8、于LPS誘導組，HZ各劑量組分泌IFN-γ的T細胞比率顯著低下（p<0.01）；（5）各組負載P.vAg和 HZ的DC刺激自體淋巴細胞增殖指數(shù)（PI）分析結果顯示：負載P.vAg的DC刺激Self LC的PI均增加，其中P.vAg1.0μg/ml組PI較未誘導組組顯著升高（p<0.05），而負載HZ的DC刺激Self LC的PI較未誘導組組無明顯變化（p>0.05）；同時相對于LPS誘導組，負載P.vAg的DC刺激Self LC的PI無

9、顯著差異（p>0.05），而負載HZ的DC刺激Self LC的PI減低，其中HZ1.0μmol/L、10.0μmol/L組LC增殖顯著低下（p<0.05, p<0.01）；（6）經(jīng) P.vAg（1.0μg/ml、10.0μg/ml）作用4h后DC的TLR2 mRNA表達較未誘導組顯著升高（p<0.01，p<0.05），而HZ作用各組無明顯變化（p>0.05）；相對于LPS誘導組，P.vAg各組DC表達TLR2 mRNA均無顯著變化（p>

10、0.05），但HZ作用的各組DC表達TLR2 mRNA均低落（p<0.01），提示P.vAg誘導DC能上調其TLR2 mRNA表達，而HZ對TLR2 mRNA表達無明顯作用。
　　結論：（1）P.vAg能上調DC部分成熟性表型的表達，負載P.vAg的DC能促進同源淋巴細胞增殖和T細胞分泌IFN-γ，表明P.vAg具有促進DC成熟的作用；（2）HZ能下調DC部分成熟性表型的表達，負載HZ的DC能抑制同源淋巴細胞增殖和T細胞分泌IFN