休克腸淋巴液對脾樹突狀細胞免疫功能的影響.pdf

1、背景:免疫功能紊亂是重癥失血性休克患者出現(xiàn)全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)、以及隨之而來的多器官功能障礙綜合征(MODS)、甚至引起死亡的重要原因。機體中一系列的免疫細胞，通過產(chǎn)生大量細胞因子以非特異性方式對抗外來抗原的入侵。其中，樹突狀細胞(DCs)等抗原遞呈細胞可將入侵信息遞呈給T淋巴細胞，啟動長期特異性免疫機制，從而發(fā)揮抗感染的作用。研究表明，失血性休克發(fā)展過程中，先天免疫最先受累，并進一步導(dǎo)致免疫功能抑制、促進炎癥全身擴散，是發(fā)生

2、SIRS、MODS與膿毒癥的重要免疫學(xué)基礎(chǔ)。休克腸淋巴液回流是失血性休克后組織損傷、器官功能障礙的重要發(fā)病學(xué)基礎(chǔ);已有的研究也發(fā)現(xiàn)，阻斷休克腸淋巴液回流可降低脾臟、胸腺等免疫器官的結(jié)構(gòu)損傷，改善細胞免疫功能。但休克腸淋巴液回流與DCs這一啟動細胞免疫功能的抗原遞呈細胞之間的關(guān)系，還不清楚。
　　目的:本研究在建立失血性休克小鼠模型的基礎(chǔ)上，應(yīng)用脾DCs免疫磁珠分離技術(shù)，觀察腸淋巴液引流、腸淋巴液孵育對DCs在脂多糖(LPS)處理前

3、后產(chǎn)生細胞因子能力的影響，初步揭示腸淋巴液對DCs免疫功能的調(diào)節(jié)作用。
　　方法:健康雄性BALB/C小鼠，分為假手術(shù)組、休克組、休克+引流組。休克組與休克+引流組動物復(fù)制失血性休克模型（40±2 mmHg維持60 min后行液體復(fù)蘇），休克+引流組動物于液體復(fù)蘇結(jié)束即刻行腸淋巴液引流，3h后或假手術(shù)組于相應(yīng)時間點，取脾，應(yīng)用免疫磁珠法(抗CD11c)分選獲取脾臟DCs;離體培養(yǎng)環(huán)境狀態(tài)下，觀察三組小鼠脾DCs以及在LPS孵育后產(chǎn)

4、生TNF-α、IL-10、IL-12的能力。取健康雄性BALB/C小鼠，復(fù)制失血性休克模型，部分引流低血壓60 min期間的休克期腸淋巴液(post-hemorrhagic shock mesenteric lymph during hypotenstion,PHSML-H)，部分引流液體復(fù)蘇后腸淋巴液(post-hemorrhagic shcok andmesenteric lymph after resuscitation，PHSM

5、L-R)，取正常小鼠引流正常腸淋巴液(normal mesenteric lymph，NML);然后取正常小鼠脾臟，應(yīng)用免疫磁珠法分選獲取脾臟DCs;將NML、PHSML-H、PHSML-R分別與正常DCs培養(yǎng)，并以LPS做為陽性對照，同時設(shè)空白對照，觀察各組DCs在3、6、12、24 h以及再次分別與LPS處理后24 h產(chǎn)生TNF-α、IL-10、IL-12的能力。
　　結(jié)果:急性分離的脾DCs，經(jīng)免疫磁珠分選、流式細胞術(shù)檢測，

6、獲得的CD11c+細胞純度均在90％以上。假手術(shù)組、休克組和休克+引流組小鼠急性分離的脾DCs，在體外培養(yǎng)24 h后，各組間培養(yǎng)上清液中TNFα、IL-10和IL-12含量未見統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05);各組脾DCs與LPS共孵育24 h后，假手術(shù)組與休克+引流組培養(yǎng)上清液中的TNF-α、IL-10和IL-12含量、以及休克組培養(yǎng)上清液中的TNF-α、IL-10的含量均顯著高于組內(nèi)未經(jīng)LPS處理組(P＜0.05);更重要的是，結(jié)果發(fā)現(xiàn)休

7、克組TNFα、IL-12以及休克+引流組IL-12的含量均顯著低于假手術(shù)組(P＜0.05);休克+引流組TNFα的含量顯著高于休克組（P＜0.05）。
　　急性分離的小鼠脾DCs經(jīng)腸淋巴液處理后的結(jié)果顯示，PHSML-H、PHSML-R在多個時間點引起了DCs培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-10的增加，但并未引起IL-12水平的變化，且TNF-α、IL-10均顯著低于LPS陽性對照同一時間點的濃度;已經(jīng)與各種因素孵育后的DCs再次接

8、受LPS刺激，與PHSML-H、PHSML-R孵育后的DCs產(chǎn)生TNF-α、IL-10、IL-12的能力有一定的增強，但仍有多個時間點低于LPS陽性對照組，尤其是PHSML-R孵育組更是遠遠低于LPS陽性對照組。
　　結(jié)論:失血性休克引起了脾DCs分泌細胞因子的功能障礙，這是失血性休克后免疫功能抑制的原因之一;以腸淋巴液引流的方式減少休克腸淋巴液回流，對恢復(fù)脾DCs功能具有一定的有利的作用，這是阻斷休克腸淋巴液回流改善機制免疫功能