線粒體途徑在腸淋巴液介導(dǎo)失血性休克大鼠細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、背景:近年來(lái)的研究表明，腸淋巴途徑在失血性休克后多器官損傷中的作用非常重要，以腸淋巴管結(jié)扎或腸淋巴液引流的手段，阻斷失血性休克腸淋巴液回流至體循環(huán)，均不同程度地降低了肝、腎、心、肺等組織器官的炎癥反應(yīng)、結(jié)構(gòu)損傷，其機(jī)制與減少各器官組織的細(xì)胞凋亡有關(guān)。同時(shí)，一般認(rèn)為，線粒體損傷引起的與細(xì)胞凋亡相關(guān)物質(zhì)細(xì)胞色素C(CytoC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)等物質(zhì)的異常表達(dá)，是線粒體途徑引起細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵分子。但線粒體途徑

2、是否參與了休克腸淋巴液介導(dǎo)組織細(xì)胞凋亡中的作用，值得研究。
　　目的:為了進(jìn)一步探討線粒體途徑在腸淋巴液介導(dǎo)失血性休克大鼠組織細(xì)胞凋亡中的作用，本研究復(fù)制大鼠失血性休克模型，觀察腸淋巴液引流對(duì)心肌、肝、肺、腎組織細(xì)胞CytoC蛋白表達(dá)、Caspase-3活性以及調(diào)控線粒體凋亡的關(guān)鍵物質(zhì)生存素(Survivin)含量的影響。從線粒體損傷引起細(xì)胞凋亡的角度探討腸淋巴液回流至多器官損傷的機(jī)制，豐富休克多器官損傷的腸淋巴途徑學(xué)說(shuō)。

3、　　方法:雄性Wistar大鼠18只隨機(jī)均分為:假手術(shù)組（Sham）、休克組(Shock)、休克+引流組（Shock+drainage）。所有大鼠戊巴比妥鈉(50mg/kg)麻醉后，分離右側(cè)股動(dòng)脈和股靜脈，經(jīng)股靜脈注射肝素鈉(1 ml/kg，500 U/kg)全身抗凝，股動(dòng)脈插管連接生物信號(hào)采集系統(tǒng)，用于監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈血壓（mean artery pressure，MAP）;分離左側(cè)股動(dòng)脈后插管，然后連接注射器固定于抽注機(jī)上備放血用。腹部

4、手術(shù):剝離與腸系膜上動(dòng)脈（superior mesenteric artery，SMA）伴行的腸淋巴管(mesenteric lymphduct，MLD)。所有手術(shù)完成后，穩(wěn)定30 min，應(yīng)用抽注機(jī)經(jīng)左股動(dòng)脈勻速緩慢放血，10 min內(nèi)將MAP降至40 mmHg，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中通過(guò)推注機(jī)調(diào)整放血量維持MAP在（40±2）mmHg水平。維持低血壓60 min后，將放出的全血與林格氏液按1∶1混勻，30 min內(nèi)經(jīng)右側(cè)股靜脈輸液復(fù)蘇。輸液結(jié)束

5、后觀察3h。休克組、休克+引流組按上述方法復(fù)制失血性休克模型;休克+引流組在輸液后行腸系膜淋巴管插管，引流腸淋巴液至休克3h;假手術(shù)組動(dòng)物僅進(jìn)行相同的手術(shù)操作，但不放血、不輸液，觀察至其它各組相同時(shí)間。3h后，留取心肌、肺、肝、腎組織，部分組織于4％多聚甲醛溶液固定、石蠟包埋、切片，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)心肌、肝、肺、腎組織中CytoC表達(dá);部分組織用于制備10％組織勻漿，檢測(cè)Caspase-3活性與Survivin含量。

6、>　　結(jié)果:免疫組化染色結(jié)果顯示:與假手術(shù)組比較，休克組心肌、肝、肺、腎等組織CytoC表達(dá)明顯增加，腸淋巴液引流明顯降低了各組織細(xì)胞CytoC的表達(dá)。與假手術(shù)組比較，休克組大鼠心肌、肝、肺、腎各組織Caspase-3活性明顯升高;腸淋巴液引流降低了失血性休克大鼠各組織的Caspase-3活性。與假手術(shù)組比較，休克組大鼠心肌、肝、肺、腎各組織Survivin含量明顯降低;腸淋巴液引流顯著提高了各組織Survivin含量。
　　結(jié)論