ACE-ACE2在休克腸淋巴液介導(dǎo)腎臟損傷中的作用.pdf

1、外傷、術(shù)中大出血等導(dǎo)致的失血性休克是臨床上常見的急危重癥，失血性休克后引起的急性腎損傷(acute kidney injury，AKI)是常見的并發(fā)癥之一，已有研究表明，失血性休克后腸淋巴液(post-hemorrhagic shock mesenteric lymph，PHSML)回流在失血性休克后腎臟損傷的發(fā)病過程中具有重要作用，阻斷PHSML回流可減輕腎臟損傷，其機(jī)制與減輕腎臟炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等因素有關(guān)。
　　腎素-血管緊

2、張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system，RAS)是人體中重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)之一，RAS包含兩條關(guān)鍵軸:血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（angiotensin-converting enzyme，ACE）-血管緊張素(angiotensin，Ang)Ⅱ-AngⅡ1型受體(AngⅡ1receptor，AT1R)和ACE2-Ang(1-7)-Mas相關(guān)G蛋白偶聯(lián)受體(Mas-related G-protein-coupled recept

3、or，MasR)，研究表明，失血性休克后腎組織ACE/ACE2表達(dá)失衡，以腸淋巴液引流減少PHSML回流的干預(yù)措施可改善腎組織ACE/ACE2的失衡，說明ACE/ACE2失衡參與了PHSML介導(dǎo)的腎損傷，但其機(jī)制還待進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)以雄性C57小鼠為研究對(duì)象，利用RAS兩條軸的工具藥或ACE2-/-小鼠，調(diào)節(jié)ACE/ACE2平衡，探討ACE/ACE2平衡在PHSML介導(dǎo)腎臟損傷中的作用。
　　首先，將18只C57雄性小鼠隨機(jī)均分

4、為3組:Sham、Shock和Shock+Ligation組，Shock和Shock+Ligation組小鼠麻醉后打開腹腔，分離腸淋巴管，在腸淋巴管下穿線，不結(jié)扎，分離兩側(cè)股動(dòng)脈，左側(cè)股動(dòng)脈插管后連接生物信號(hào)采集系統(tǒng)監(jiān)測(cè)小鼠血壓，右側(cè)股動(dòng)脈插管后連接推注機(jī)，用于放血和復(fù)蘇，術(shù)后穩(wěn)定30min后開始放血，10min內(nèi)將血壓降至40mmHg，維持40±2mmHg1h后，將抽出的血與林格液按體積比1∶1混勻進(jìn)行液體復(fù)蘇，復(fù)蘇完畢后Shock+

5、Ligation組小鼠結(jié)扎腸淋巴管，Shan組和Shock組不結(jié)扎。同時(shí)取18只C57雄性小鼠，建立失血性休克模型，在液體復(fù)蘇的同時(shí)，分別給予依那普利（Enalapril，10mg/kg）、氯沙坦(Losartan，50mg/kg)和Ang(1-7)(1×10-7mol/kg)，復(fù)蘇完畢后不結(jié)扎腸淋巴管，分別作為Shock+Enalapril、Shock+Losartan、Shock+Ang(1-7)組，每組6只;取C57雄性小鼠12只

6、，復(fù)制失血性休克模型，在復(fù)蘇的同時(shí)，分別給予MasR抑制劑A-779(0.1mg/kg)和AngⅡ（1×10-7mol/kg），復(fù)蘇完畢后結(jié)扎腸淋巴管，即為Shock+Ligation+A779組和Shock+Ligation+AngⅡ組，每組6只;取6只ACE2基因敲除(ACE2-/-)小鼠，復(fù)制失血性休克模型，復(fù)蘇完畢后結(jié)扎腸淋巴管，即為Shock+Ligation+ACE-/-組。所有小鼠完成上述手術(shù)后，在液體復(fù)蘇結(jié)束后4h或相應(yīng)

7、時(shí)間點(diǎn)，留取小鼠腎臟和血漿。HE染色后，觀察腎臟組織形態(tài)學(xué)變化;ELISA方法檢測(cè)腎組織、血漿AngⅡ和Ang(1-7)含量;免疫組織化學(xué)染色方法觀察腎組織ACE、ACE2、AT1R、MasR的表達(dá)。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Sham組小鼠腎組織結(jié)構(gòu)基本正常，Shock組小鼠腎臟出現(xiàn)了明顯的組織損傷，腸淋巴管結(jié)扎以及Enalapril、Losartan、Ang(1-7)治療減輕了休克小鼠的腎臟組織學(xué)損傷，ACE2-/-、AngⅡ、A-779

8、加重了Shock+Ligation組小鼠腎臟組織學(xué)損傷程度。Shock組腎組織ACE、AT1R表達(dá)與AngⅡ含量較Sham組明顯升高，Shock+Enalapril、Shock+Ang(1-7)、Shock+Losartan、Shock+Ligation組與Shock組相比，腎組織ACE、AT1R表達(dá)與AngⅡ含量明顯降低;Shock+Ligation+AngⅡ組腎組織AngⅡ含量較Shock+Ligation組升高，Shock+Lig

9、ation+ACE2-/-與Shock+Ligation+A-779組腎組織中AngⅡ與Shock+Ligation組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Shock組血漿AngⅡ含量較Sham組顯著升高;Shock+Enalapril和Shock+Ang(1-7)組血漿AngⅡ含量較Shock組明顯減少;Shock+Ligation+AngⅡ組血漿AngⅡ水平較Shock+Ligation組明顯升高。Shock組腎組織ACE2、MasR表達(dá)、Ang(1-7)

10、水平較Sham組明顯降低;Shock+Ang(1-7)和Shock+Ligation組腎組織ACE2、MasR表達(dá)與Ang(1-7)含量較Shock組明顯升高，Shock+Enalapril、Shock+Losartan組腎組織ACE2、MasR表達(dá)與Ang(1-7)水平與Shock無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;Shock+Ligation+ACE2-/-組腎臟ACE2表達(dá)、Ang(1-7)含量較Shock+Ligation組明顯降低，Shock+Li

11、gation+AngⅡ組腎組織MasR表達(dá)較Shock+Ligation組明顯降低，Shock+Ligation+A-779組腎臟ACE2、MasR表達(dá)與Ang(1-7)含量較Shock+Ligation組明顯降低。Shock組血漿Ang(1-7)較Sham組明顯降低，Shock+Enalapril組、Shock+Ang(1-7)組、Shock+Losartan組和Shock+Ligation組血漿Ang(1-7)含量較Shock組明顯

12、升高;Shock+Ligation+ACE2-/-、Shock+Ligation+AngⅡ和Shock+Ligation+A-779組血漿Ang(1-7)水平較Shock+Ligation組明顯降低。
　　上述研究結(jié)果表明，休克腸淋巴液介導(dǎo)腎損傷的機(jī)制與ACE-AngⅡ-AT1R高表達(dá)、ACE2-Ang(1-7)-Mas1R低表達(dá)有關(guān)，ACE/ACE2失衡參與了休克腸淋巴液介導(dǎo)的腎損傷;以RAS為切入點(diǎn)，可以調(diào)節(jié)失血性休克后的急性