休克腸淋巴液增加血管通透性的作用.pdf

1、血管通透性升高是重癥休克出現(xiàn)頑固性低血壓、發(fā)展為多器官功能障礙綜合征（multiple organ dysfunction syndrom，MODS）乃至多器官衰竭（multiple organ failure，MOF）重要原因，因此有效防治血管高通透性是重癥失血性休克治療中的關(guān)鍵。腸淋巴途徑在失血性休克后多器官損傷中的作用非常重要，以腸淋巴管結(jié)扎或腸淋巴液引流的手段，阻斷失血性休克腸淋巴液（post-hemorrhagic shock

2、 mesenteric lymph，PHSML）回流至體循環(huán)，均不同程度地降低了肝、腎、心、肺等組織器官的炎癥反應(yīng)、結(jié)構(gòu)損傷。但PHSML與失血性休克血管高通透性的關(guān)聯(lián)值得研究。為此，本研究探討PHSML在失血性休克后血管高通透性發(fā)生機(jī)制中的作用。
　　首先，應(yīng)用18只Wistar雄性大鼠隨機(jī)均分為假手術(shù)組、休克組、休克+引流組。休克組、休克+引流組大鼠常規(guī)方法復(fù)制失血性休克模型，維持低血壓（40±2 mmHg）90 min；將放

3、出的全血與等量林格氏液混勻后，經(jīng)股靜脈行液體復(fù)蘇（30 min）；輸液結(jié)束后再觀察6 h；休克+引流組大鼠在液體復(fù)蘇后持續(xù)引流腸淋巴液至6h；假手術(shù)組動(dòng)物僅進(jìn)行相同的手術(shù)操作，觀察至相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)。各組大鼠在液體復(fù)蘇后5.5 h或相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，經(jīng)股靜脈注射1％伊文氏藍(lán)（EB）溶液（30 mg/kg）。30 min后，用生理鹽水先后行體循環(huán)、肺循環(huán)灌洗。然后，留取固定位置的心肌、肝、脾、腎、小腸、肺組織，觀察各器官組織的外觀，檢測滲出至各組織中

4、的EB濃度、干/濕（D/W）比。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，休克組肺、心肌、腎、肝、脾、腸組織與休克+引流組心肌、腎組織EB含量均顯著高于假手術(shù)組，休克+引流組肺、心肌、腎、肝、脾、腸組織 EB含量均顯著低于休克組；休克組肺、心肌、腎、肝、脾、腸組織D/W值均顯著低于假手術(shù)組，休克+引流組肺、心肌、腎、肝、脾、腸組織D/W值均顯著高于休克組。研究結(jié)果表明休克腸淋巴液引流可降低各組織器官的血管通透性。
　　然后，應(yīng)用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human um

5、bilical vein endothelial cells，HUVECs）作為實(shí)驗(yàn)材料，將引流至體外的休克腸淋巴液與其共孵育，觀察休克腸淋巴液對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性的作用。根據(jù)處理因素不同，實(shí)驗(yàn)分為：DMEM組（DMEM培養(yǎng)基）、DMEM+FBS（DMEM培養(yǎng)基含10%FBS）、LPS組（含10μg/ml LPS的DMEM培養(yǎng)基）、4%休克復(fù)蘇后0~3h腸淋巴液組（含4%休克復(fù)蘇后0~3h腸淋巴液的DMEM培養(yǎng)基，簡稱4%PHMSL

6、0~3 h組）、10%休克復(fù)蘇后0~3 h腸淋巴液組（含10%休克復(fù)蘇后0~3 h腸淋巴液的DMEM培養(yǎng)基，簡稱10%PHMSL0~3 h組）、4%休克復(fù)蘇后3~6 h腸淋巴液組（含4%休克復(fù)蘇后3~6 h腸淋巴液的DMEM培養(yǎng)基，簡稱4%PHMSL3~6 h組）、10%休克復(fù)蘇后3~6 h腸淋巴液組（含10%休克復(fù)蘇后3~6 h腸淋巴液的DMEM培養(yǎng)基，簡稱10%PHMSL3~6 h組）；將7種不同的處理因素與融合至單層的HUVECs

7、共培養(yǎng)。各種因素與HUVECs作用6 h后，觀察對HUVECs形態(tài)（光鏡、掃描電鏡）、活性（MTT法）的影響；并應(yīng)用Transwell小室，觀察各種處理因素對HUVECs的跨細(xì)胞電阻（trans-endothelial electrical resistance，TEER）以及 FITC-Albumin透過情況的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)， DMEM組與FBS+DMEM組形態(tài)、活性、TEER以及熒光通透系數(shù)均無明顯差異；4%和10%休克復(fù)蘇后0~3

8、 h腸淋巴液、4%和10%休克復(fù)蘇后3~6 h腸淋巴液以及LPS均引起了HUVECs的形態(tài)學(xué)損傷、降低了HUVECs的細(xì)胞活性與TEER、增加了HUVECs的熒光通透系數(shù)。為了進(jìn)一步探討PHMSL增加HUVECs通透性的機(jī)制，應(yīng)用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色的方法，觀察了上述處理因素對HUVECs細(xì)胞骨架蛋白F-actin表達(dá)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，4%和10%休克復(fù)蘇后0~3 h腸淋巴液、4%和10%休克復(fù)蘇后3~6 h腸淋巴液以及LPS均降低了H

9、UVECs細(xì)胞骨架蛋白F-actin的表達(dá)。
　　通過上述研究，結(jié)果表明腸淋巴液引流有利于降低失血性休克導(dǎo)致各組織器官過高的血管通透性；引流至體外的失血性休克腸淋巴液可引起HUVECs損傷，增加HUVECs單層細(xì)胞的通透性，其機(jī)制與降低細(xì)胞骨架蛋白F-actin的表達(dá)有關(guān)。這些結(jié)果為以腸淋巴液為靶點(diǎn)，針對血管通透性，防治重癥休克后的多器官損傷提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，這對于防治休克具有積極意義。但腸淋巴液中毒性物質(zhì)的篩選以及腸淋巴液導(dǎo)致血管